上海某猪场大肠杆菌中mcr-1基因的传播机制研究

发布时间：2017-12-21 05:00

  本文关键词：上海某猪场大肠杆菌中mcr-1基因的传播机制研究　出处：《华南农业大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：近年来由于多耐药革兰阴性菌的广泛流行,尤其是碳青霉烯耐药革兰阴性菌株的不断出现,使得黏菌素这一老药被重新用于治疗这些多重耐药菌,不幸地是,黏菌素耐药现象也变得越来越严重。多粘菌素的耐药往往是由染色体突变造成的,而最近出现了质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1,自报道之后,mcr-1基因成为研究热点。本研究对首次发现mcr-1基因的上海某猪场大肠杆菌进行mcr-1基因检测,以进一步研究该猪场的mcr-1流行情况和传播机制,为控制mcr-1基因的扩散提供理论依据。对2013年7月份分离自上海市某猪场的47株大肠杆菌采用PCR方法检测mcr-1基因,结果有27株(57.4%)多粘菌素不敏感且全部检测到mcr-1基因,说明了该猪场大肠杆菌对黏菌素耐药机制主要由mcr-1介导。采用琼脂稀释法测定mcr-1阳性大肠杆菌对抗菌药的敏感性,结果表明27株mcr-1阳性菌对氨苄西林的耐药率为77.8%(21/27),对头孢噻肟的耐药率为33.3%(9/27),对磷霉素的耐药率为25.9%(7/27),对氯霉素、氟苯尼考、复方新诺明的耐药率均达到100%,表明所有菌株都呈现不同程度的多重耐药现象。所有阳性菌株对阿米卡星和亚胺培南均敏感。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法研究mcr-1阳性大肠杆菌间的克隆传播关系。PFGE分型结果发现26株分型成功,1株分型失败,26株分型成功的可以分为A-S这19个型,表明大部分mcr-1阳性大肠杆菌不存在克隆传播关系。对27株mcr-1阳性大肠杆菌进行接合转移试验以研究质粒的可转移性,结果有22株成功接合,其中有2株各获得2株不同接合子,5株多次接合均失败。对获得的24株接合子进行复制子分型,分别有9、6、4、2株为IncX4、IncHI2、IncI2、IncF型质粒,其他3株分别为IncY、IncHI2和IncY、F:2 A-B:53和IncX4型,表明携带mcr-1的质粒丰富多样。采用PCR方法检测接合子中其他耐药基因的携带情况,发现5株IncHI2型质粒同时检测到blaCTX-M-14、fosA3、oqxAB和floR,1株IncHI2型质粒检测到blaCTX-M-14、fosA3和floR,还有1株IncHI2型质粒检出blaCTX-M-15、fosA3、oqxAB和floR,说明IncHI2型质粒往往携带blaCTX-M、fosA3、oqxAB和floR耐药基因与mcr-1共同传播。采用PCR-mapping方法对mcr-1基因上下游侧翼序列进行分析,共发现了3种不同类型的基因环境,其中有7株在mcr-1基因的上游检测到了插入序列ISApl1,有6株在mcr-1的上下游均检测到了ISApl1,其他14株在mcr-1的上下游均未测到ISApl1。对24株携带mcr-1基因的大肠杆菌接合子和5株阳性原菌进行S1-PFGE并与mcr-1探针进行Southern杂交。结果显示,IncX4型质粒大小约为28.8~33.3kb,IncI2型质粒大小约为54.7~78.2kb,IncY型质粒大小约为78.2kb,IncHI2型质粒大小约为216.9~-244.4kb,F29型质粒大小约为54.7kb,F53型质粒大小约为138.9kb,未接合成功的5株原菌中有1株的mcr-1基因位于染色体上,其他均位于质粒上,其中1株质粒大小约为28.8~33.3kb,1株质粒大小约为244.4~310.1kb,其他2株质粒大小约为78.2~104.5kb。本研究结果表明,mcr-1基因在该猪场广泛传播,主要通过IncHI2、IncX4和IncI2型质粒进行传播,携带mcr-1的IncHI2型质粒往往同时携带blaCTX-M、fosA3、oqxAB和floR等耐药基因共同传播。因此,我们应该对这个新发现的黏菌素耐药基因mcr-1给予高度的重视。
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 张正琼;黄永茂;;大肠埃希菌质粒介导的耐药机制研究进展[J];西南军医;2012年02期

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本文编号：1314773