转g10evo基因抗草甘膦大豆的研究
本文关键词：转g10evo基因抗草甘膦大豆的研究 出处：《浙江大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：大豆[Glycine max (L.)]是重要的粮油、饲料和经济作物,杂草防治是大豆栽培管理中的重要工作,种植抗除草剂转基因大豆可以大幅度提高杂草防治效率,降低杂草防治成本。本研究以本实验室获得的草甘膦抗性基因glOevo构建植物转化载体pCAMBIA1300-35S-g10evo,利用农杆菌介导法侵染大豆子叶节,通过诱导、筛选获得抗草甘膦转基因大豆。本研究对获得的转基因大豆进行草甘膦抗性水平筛选,获得具有良好抗性的转化株系G10evo。利用Western blot法检测G10evo草甘膦抗性基因glOevo的表达,检测到大小约为46kDa的表达蛋白；利用酶联免疫法定量分析转基因大豆G10evo V4期抗草甘膦基因的表达量,结果显示第二片复叶的EPSPS(5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶)含量为276.73μg/g,占总可溶性蛋白的0.76%。Southern blot分析结果显示,G10evo含有的外源抗草甘膦基因为单拷贝插入。遗传稳定性分析表明,g10evo基因在G10evo各代中能够稳定遗传。在温室中进行草甘膦抗性测定,施用4倍正常田间浓度的草甘膦对G10evo没有明显的药害。G10evo能高抗草甘膦,具有产业化应用前景。
[Abstract]:Soybean. [Glycine max L.) is an important grain, oil, feed and cash crops. Weed control is an important work in soybean cultivation and management. Planting herbicide resistant transgenic soybean can greatly improve the efficiency of weed control. In this study, glyphosate resistance gene glOevo obtained in our laboratory was used to construct plant transformation vector pCAMBIA1300-35S-g10evo. Transgenic soybean resistant to glyphosate was selected by Agrobacterium tumefaciens mediated infection of soybean cotyledons. Glyphosate resistance level of transgenic soybean was screened. The transgenic strain G10evo. the expression of G10evo glyphosate resistance gene glOevo was detected by Western blot method. The expressed protein was about 46kDa in size. Enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to analyze the expression of glyphosate-resistant genes in G10evo V4 transgenic soybean. The results showed that the content of EPSPS5enolpyruvate-3-phosphate synthetase in the second compound leaf was 276.73 渭 g / g. Southern blot analysis showed that the extraneous glyphosate resistant gene contained in G10evo was a single copy insertion, and genetic stability analysis showed that G10evo contained a single copy of glyphosate resistance gene. G10evo gene can be inherited stably in every generation of G10evo. Glyphosate resistance was tested in greenhouse. The application of 4 times normal field concentration of glyphosate had no obvious effect on G10evo. G10evo had high resistance to glyphosate and had the prospect of industrial application.
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S565.1
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