嗜热木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及其酶学性质

发布时间：2018-01-16 15:38

  本文关键词：嗜热木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及其酶学性质　出处：《基因组学与应用生物学》2016年11期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：木聚糖酶Umxyn10A,属于GH10家族,包含一段跨膜区和GH10家族催化功能域,将跨膜区去掉后,剩余部分重命名为Umxyn10AQ。按毕赤酵母密码子偏好性将Umxyn10AQ序列进行密码子优化,与毕赤酵母表达载体p PIC9K相连。重组质粒p PIC9K-Umxyn10AQ经SalⅠ单酶切线性化后转至毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115。经G418筛选得到重组毕赤酵母菌株GS115/Umxyn10AQ,每12 h添加1%甲醇诱导剂。DNS法测定重组木聚糖酶re Umxyn10AQ酶活,最高酶活达到15 U/m L,SDS-PAGE分析表明,re Umxyn10AQ相对分子质量为45.0 k D。重组木聚糖酶re Umxyn10AQ的最适p H为8.0,最适反应温度85℃,Co2+对该酶活有显著促进作用,提高了近20%,水解产物为木糖(14%)、木二糖(86%)。结果表明,木聚糖酶Umxyn10AQ在毕赤酵母中成功表达并且分泌到胞外,相较于大肠杆菌表达产物Umxyn10A,最适p H提高了1.5个单位、最适温度提高了10个单位,p H耐受性和温度耐受性都有所改善,并且主要水解产物仍为木二糖。
[Abstract]:Xylanase Umxyn10A, belonging to the GH10 family, contains a transmembrane region and a catalytic domain of the GH10 family. The rest was renamed Umxyn10AQ.The Umxyn10AQ sequence was optimized according to the codon preference of Pichia pastoris. The recombinant plasmid p PIC9K-Umxyn10AQ was linearized by Sal 鈪，

本文编号：1433755