一种快速高效的基于CcdB致死基因和SmaⅠ酶切位点的克隆体系构建

发布时间：2018-01-23 10:51

  本文关键词： 快速高效 克隆体系 ccdB基因 SmaⅠ酶切位点　出处：《基因组学与应用生物学》2017年07期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：PCR片段快速准确的构建到克隆载体是分子生物学实验的关键技术之一。快速高效低背景克隆体系的建立可以显著提高PCR产物的克隆效率及大大缩短克隆时间。本实验室开发出一种在常规条件下进行快速高效PCR连接的克隆体系。本研究将含有ccd B致死基因的gateway cassette片段,插入p UC18载体,成功构建p UC18-Ccd B致死载体,在此基础上结合ccd B致死基因内部的SmaⅠ酶切位点,开发出将PCR产物、SmaⅠ限制性内切酶、T4连接酶及p UC18-Ccd B致死载体一起加入离心管后共孵育10 min,即可转化大肠杆菌。对插入片段的重组质粒进行了酶切,PCR和测序验证,证实了该克隆体系高效可行,具有极高的阳性克隆率。该体系的建立具有高效低背景的特点,并且极大的减少了克隆步骤,省去了胶回收及双酶切过程,缩短了克隆时间,同时继承了p UC18载体的优点,具有很强的应用性及推广性。
[Abstract]:The rapid and accurate construction of PCR fragment to clone vector is one of the key techniques in molecular biology experiment. The establishment of rapid and efficient low background cloning system can significantly improve the cloning efficiency of PCR products and shorten the cloning. Our laboratory has developed a clone system for fast and efficient PCR connection under conventional conditions. This study will contain ccd. Gateway cassette fragment of B lethal gene. Inserted into p UC18 vector, we successfully constructed p UC18-Ccd B lethal vector. On this basis, we combined the Sma 鈪，

本文编号：1457368