hoxb4转基因斑马鱼造血发育中rap1b基因的表达

发布时间：2018-01-31 13:30

  本文关键词： 造血发育 hoxb rapb 斑马鱼　出处：《第三军医大学学报》2017年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的为了发现在早期造血发育中关键的调控因子,利用hoxb4转基因斑马鱼研究rap1b基因的表达变化情况,以期明确hoxb4与rap1b在早期造血发育中的关系。方法选取过表达hoxb4的斑马鱼系为研究对象,分为3组:实验组(表达hoxb4-EGFP的斑马鱼),实验对照组(表达EGFP的斑马鱼),空白对照组(野生型斑马鱼)。通过流式分选技术将实验对照组和实验组18hpf(斑马鱼胚胎受精发育18 h)、24、30、36、48hpf胚胎中带有绿色荧光(enhanced green fluorescent protein,EGFP)信号的细胞分选出来,利用实时荧光定量PCR检测分选出的细胞中的rap1b基因的表达变化;然后收集野生型斑马鱼多时相胚胎,制备rap1b基因的反义m RNA探针,通过胚胎原位杂交观察探针在3组斑马鱼胚胎18、24、30、36、48hpf杂交信号表达部位。结果 q RT-PCR结果显示实验组30、36、48hpf的斑马鱼胚胎的rap1b基因的表达明显增强(P0.05);制备了rap1b基因的反义m RNA探针,胚胎整体原位杂交结果显示:rap1b基因在3组斑马鱼胚胎18~48hpf之间神经发育和造血发育部位都有表达。结论在过表达hoxb4转基因斑马鱼中rap1b基因表达有明显的升高趋势,提示rap1b基因与hoxb4基因可能共同参与调节早期造血发育过程。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of rap1b gene by hoxb4 transgenic zebrafish in order to find the key regulatory factors in early hematopoietic development. Objective to clarify the relationship between hoxb4 and rap1b in early hematopoietic development. Methods zebrafish lines expressing hoxb4 were selected as the research object. They were divided into three groups: experimental group (zebrafish with hoxb4-EGFP expression) and experimental control group (zebrafish expressing EGFP). The control group (wild type zebrafish) was divided into experimental control group and experimental group (18 h after fertilization and development of zebrafish embryo for 18 h) by flow sorting technique. Cells with green fluorescence enhanced green fluorescent protein (EGFP) signal were isolated from 48hpf embryos. The expression of rap1b gene in the selected cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Then the wild zebrafish multitemporal embryos were collected and the antisense m RNA probes of rap1b gene were prepared. The probes were observed in 3 groups of zebrafish embryos by in situ hybridization. Results the Q RT-PCR results showed that the experimental group 30 ~ 36. The expression of rap1b gene in 48hpf zebrafish embryos was significantly enhanced. Antisense m RNA probes of rap1b gene were prepared. The results of in situ hybridization showed that:. Rap1b gene was expressed in 3 groups of zebrafish embryos at 1848hpf. Conclusion there is a clear expression of rap1b gene in overexpression of hoxb4 transgenic zebrafish. A marked upward trend. It is suggested that rap1b gene and hoxb4 gene may be involved in the regulation of early hematopoietic development.
【作者单位】： 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;贵州医科大学儿科学教研室;贵州医科大学免疫学教研室;贵州医科大学实验动物中心;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31360285)~~
【分类号】：R331
【正文快照】： with whole-mount in situ hybridization(WISH).Results The results of q RT-PCR showed that theexpression of rap1b gene was significantly enhanced on 30,36 and 48hpf in the experimental group(P0.05).Antisense m RNA probes of rap1b gene were successfully ac

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本文编号：1479174