PLCD1基因对胰腺癌细胞抑制作用的研究
本文关键词： PLCD1 胰腺癌 周期 凋亡 迁移和侵袭 出处：《重庆医科大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:探讨pcDNA3.1-PLCD1质粒转染胰腺癌细胞CAPAN-1和BXPC-3后,对CAPAN-1和BXPC-3的PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白表达的影响以及对CAPAN-1和BXPC-3细胞的增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法:首先培养人正常胰腺导管上皮细胞株HPDE6C7和胰腺癌细胞株CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3,并提取五组细胞的RNA后逆转录,再进行PCR扩增反应筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞株;再将挑选出的胰腺癌细胞株CAPAN-1和BXPC-3进行转染,实验分为pcDNA3.1-PLCD1转染组和pcDNA3.1转染组;再进行RT-PCR检测转染后CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA的表达情况,进行Western blot检测其PLCD1蛋白的表达情况,CCK-8和集落形成检测转染后细胞CAPAN-1和BXPC-3增殖情况,流式测定和分析其周期和凋亡情况,Transwell检测转染后CAPAN-1和BXPC-3的迁移及侵袭能力。结果:成功筛选出低表达PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞用于进行后续实验,CAPAN-1和BXPC-3细胞的pcDNA3.1-PLCD1转染组高表达PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白;同时CAPAN-1和BXPC-3细胞的pcDNA3.1-PLCD1转染组可抑制细胞增殖、迁移及侵袭;另外pcDNA3.1-PLCD1转染组可促进CAPAN-1和BXPC-3细胞周期阻滞于G1期,并可促进细胞凋亡。结论:PLCD1基因可促进胰腺癌CAPAN-1和BXPC-3细胞凋亡并使细胞停在G1期,并可抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。
[Abstract]:Objective: to investigate the transfection of pcDNA3.1-PLCD1 plasmid into pancreatic cancer cells CAPAN-1 and BXPC-3. The effects on the expression of PLCD1 mRNA and PLCD1 in CAPAN-1 and BXPC-3 and on the proliferation, cycle and apoptosis of CAPAN-1 and BXPC-3 cells. Methods: human pancreatic ductal epithelial cell line HPDE6C7 and pancreatic cancer cell line CAPAN-1pPANC-1 were first cultured. ASPC-1 and BXPC-3 were used to extract RNA from five groups of cells, and then PCR amplification was performed to screen the pancreatic cancer cell lines with low expression of PLCD1. Then the selected pancreatic cancer cell lines CAPAN-1 and BXPC-3 were transfected and divided into pcDNA3.1-PLCD1 transfection group and pcDNA3.1 transfection group. RT-PCR was used to detect the expression of PLCD1 mRNA in CAPAN-1 and BXPC-3 cells after transfection. The expression of PLCD1 protein was detected by Western blot and the proliferation of CAPAN-1 and BXPC-3 after transfection was detected by CCK-8 and colony formation. The cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry. Transwell was used to detect the migration and invasion ability of CAPAN-1 and BXPC-3 after transfection. Results:. CAPAN-1 and BXPC-3 cells with low expression of PLCD1 were successfully screened for subsequent experiments. PLCD1 mRNA and PLCD1 protein were highly expressed in pcDNA3.1-PLCD1 transfection group of CAPAN-1 and BXPC-3 cells. At the same time, pcDNA3.1-PLCD1 transfection of CAPAN-1 and BXPC-3 cells inhibited cell proliferation, migration and invasion. In addition, pcDNA3.1-PLCD1 transfection group could promote CAPAN-1 and BXPC-3 cell cycle arrest in G1 phase. Conclusion WPLCD1 gene can promote the apoptosis of CAPAN-1 and BXPC-3 cells in pancreatic cancer and stop the cells in G1 phase, and inhibit the ability of cell proliferation, migration and invasion.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9
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，本文编号：1481612
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