鼻咽癌外泌体miR-20a通过靶向BCL2L11基因抑制肿瘤相关巨噬细胞凋亡

发布时间：2018-02-07 15:26

  本文关键词： 鼻咽癌 外泌体 miR-20a BCL2L11 肿瘤相关巨噬细胞　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:相关研究表明,鼻咽癌中肿瘤细胞来源的外泌体中有大量微小RNA(microRNA,简称miRNA),其中有一些是显著上调的,本研究拟借助生物信息学数据库及软件对上述miRNA的可能靶点和相关信号通路进行预测,并研究是否有相应的miRNA和对应靶基因参与了在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中发挥重要作用的肿瘤相关巨噬细胞的凋亡过程,并对其调控机制进行初步探索。方法:通过生物信息学方法确定目标mi RNA及其靶基因,先使用TargetScan、MicroCosm和miRTarBase三个在线分析数据库,预测即有研究证实了的在鼻咽癌中表达显著上调的mi RNA的靶mRNA;从预测结果中找出三个软件预测的交集;再借助UniProt在线数据库筛选出与凋亡功能相关的候选靶mRNA及对应的mi RNA;最后利用miRanda在线数据库/软件预测miRNA-mRNA的相互作用位点。之后分离鼻咽癌患者血清及鼻咽癌细胞培养基中的外泌体,先通过电镜成像确认是否有外泌体被成功分离聚集;再通过实时荧光定量PCR检测外泌体内候选miRNA的表达量;然后使用按前述方法获得的外泌体处理原代培养的健康志愿者的外周血巨噬细胞,并观察这些细胞是否摄取了外泌体以及摄取外泌体后其凋亡指数的变化和凋亡通路相关蛋白量的变化。最后,在体外应用miR-20a的拟似物及抑制物转染巨噬细胞。对上述干预后的巨噬细胞进行凋亡指数以及凋亡通路相关蛋白定量检测。结果:经生物信息学分析发现:鼻咽癌患者血清或者鼻咽癌细胞培养基中表达显著上调的mirna中mir-20a与凋亡有最密切的关系,其与凋亡有关的候选靶基因为bcl2l11和casp2基因(分别编码bim和caspase-2)。经透射电镜成像证实,从鼻咽癌患者的血清以及5-8f细胞的培养基中均可以分离出丰富的外泌体,这些外泌体可以被体外原代培养的巨噬细胞大量吞噬。被来自5-8f细胞培养基和鼻咽癌患者血清提取的外泌体处理的巨噬细胞的凋亡指数显著低于用空白对照组、np69细胞培养基和健康志愿者血清提取的外泌体处理的巨噬细胞。使用westernblot定量检测caspase-2蛋白和bim蛋白发现:caspase-2蛋白在各组间无显著差异;5-8f细胞培养基和鼻咽癌患者血清提取的外泌体处理的巨噬细胞的bim蛋白显著少于其他组。使用实时荧光定量pcr检测外泌体内mir-20a的表达发现:来自5-8f细胞培养基提取的外泌体中的mir-20a含量显著高于np69细胞培养基提取的外泌体中的mir-20a含量;由鼻咽癌患者血清提取的外泌体中的mir-20a的含量显著高于健康志愿者血清提取的外泌体中的mir-20a含量。利用mir-20a拟似物及抑制物转染原代培养的巨噬细胞发现:相对于对照组,mir-20a拟似物组的凋亡指数显著减少;而相对于对照组,抑制物组的凋亡指数没有显著差别。相对于对照组,mir-20a拟似物组的bim蛋白含量显著减少;而相对于对照组,抑制物组的bim蛋白没有显著差别。相对于对照组,mir-20a拟似物组的caspase-9蛋白含量显著减少;而相对于对照组,抑制物组的caspase-9蛋白没有显著差别。相对于对照组,mir-20a拟似物组的caspase-3蛋白含量显著减少;而相对于对照组,抑制物组的caspase-3蛋白没有显著差别。结论:本研究证明了鼻咽癌细胞可以过表达miR-20a,而且可以经过外泌体转移进入巨噬细胞,进而抑制其凋亡。其机制是miR-20a抑制了Bim-Caspase-9-Casepase-3凋亡途径的活化。
[Abstract]:Objective : To study the apoptosis of tumor - related macrophages in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) by means of bioinformatics , and to investigate whether there are corresponding miRNA and target genes involved in the growth , invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma . Conclusion : The mechanism is that miR - 20a inhibits the activation of the apoptosis pathway of Bim - Caspase - 9 - Casepase - 3 .

【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.63

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本文编号：1494702