基于RNA-Seq的雅致放射毛霉羧肽酶研究及其基因AecpY在毕赤酵母中的表达和特性研究

发布时间：2018-02-20 07:47

本文关键词： 丝氨酸羧肽酶雅致放射毛霉克隆表达酶活　出处：《华南理工大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：雅致放射毛霉是生产腐乳、腊八豆、豆豉等风味食品的主要菌种,其能分泌多种蛋白酶,对腐乳发酵后期的风味物质的形成有很重要的作用。蛋白酶是催化蛋白质中肽键水解的酶,到本世纪初,已经报导的微生物蛋白酶估计超过900种,生物体的生理活动和疾病的发生如食物的消化吸收、血液的凝固、溶血作用、炎症、血压调节、细胞分化自溶,机体衰老、癌症转移、生理活性肽的活化等,都与蛋白酶有关。蛋白酶涉及到生活的各个方面,与人类生活息息相关。丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶,在生物有机体中起着重要而广泛的生理作用。丝氨酸羧肽酶是一类属于α/β水解酶家族的真核生物蛋白水解酶,属于SC族羧肽酶中的S10家族,主要存在于植物或真菌的液泡和动物的溶酶体内,目前已从植物和真菌中分离到大量的丝氨酸羧肽酶。本论文首先对雅致放射毛霉转录组数据中的羧肽酶进行了分析,一共7种羧肽酶,主要分布在M28、S28和S10家族中,对这7种羧肽酶进行了基因序列、所属家族和进化关系等生物信息学的分析。随后进一步培养观察了雅致放射毛霉1-3 d在麸皮培养基上的生长形态,并成功克隆得到了雅致放射毛霉羧肽酶基因的全长基因AecpY,通过构建重组表达菌株p ICh-AecpY-GS115,成功表达并得到了羧肽酶rAecpY。经过对酶液进行纯化脱盐等处理得到较高纯度的目标蛋白,并对该羧肽酶的酶学性质进行了进一步的研究,研究结果表明:rAecpY的最高酶活在pH为5时,此羧肽酶适合在弱酸性条件下进行反应,属于酸性蛋白酶一类;在40℃时酶活达到最高,20℃-50℃范围内具有良好的稳定性;抑制剂PMSF对其酶活影响较大,抑制剂为EDTA时,酶活受到的影响非常小,由此可推断蛋白酶为丝氨酸羧肽酶;金属离子Zn~(2+)和Mn~(2+)对酶活有一定的促进作用,而Cu~(2+)和Fe~(2+)则对酶活有抑制作用。
[Abstract]:In this paper , a kind of eukaryotic proteolytic enzyme , which has been reported at the beginning of this century , is a kind of eukaryotic proteolytic enzyme which has been reported at the beginning of this century . It is a kind of eukaryotic proteolytic enzyme which has been reported at the beginning of this century . It is a kind of eukaryotic proteolytic enzyme which has been reported at the beginning of this century .

【学位授予单位】：华南理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q78;Q936

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