新疆辣椒CMV基因组序列分析与CP基因多克隆抗体制备

发布时间：2018-02-24 03:43

本文关键词： 黄瓜花叶病毒序列分析外壳蛋白原核表达蛋白质印迹检测　出处：《生物技术通报》2017年08期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因组片段,并进行序列分析,构建CMV CP基因的原核表达载体,并制备CP基因的多克隆抗体。利用RT-PCR技术,克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3 357 nt)、RNA2(3 042 nt),RNA3(2 212 nt)全基因组片段,与Gen Bank上登陆的CMV亚组IA、亚组IB、亚组Ⅱ分离物进行序列分析和系统进化树分析。将LJ-10 CMV CP基因克隆到原核表达载体p ET-22b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达纯化,以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备CMV特异性抗血清,并进行间接ELISA和Western blotting分析。结果显示,成功克隆了新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1、RNA2、RNA3全基因组片段,序列分析及系统进化树分析表明,该分离物属于CMV亚组IB。成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体p ET-CMV-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得了与预期大小一致的分子量约为27 k D的重组蛋白,制备了CMV的特异性抗血清。间接ELISA和Western blotting分析表明,制备的抗血清效价为1:500-1 000。新疆辣椒LJ-10 CMV分离物属于CMV亚组IB,成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体,制备了相应的多克隆抗体。
[Abstract]:The genomic fragment of LJ-10 CMV of Xinjiang pepper was cloned and sequenced. The prokaryotic expression vector of CMV CP gene was constructed, and the polyclonal antibody of CP gene was prepared. The whole genome fragment of Xinjiang pepper LJ-10 CMV was cloned from RNA1(3 357ntTntHN (3 042 nt), and sequenced and phylogenetic tree analysis were performed with CMV subgroup IA3, subgroup II isolated from Gen Bank. The LJ-10 CMV CP gene was cloned into the prokaryotic expression vector p#en8#, and the gene was cloned into the prokaryotic expression vector p#en8#. The purified recombinant protein was used as antigen to immunize rabbits to prepare CMV specific antiserum. Indirect ELISA and Western blotting analysis were carried out. The results showed that the whole genome fragment of Xinjiang pepper LJ-10 CMV RNA1 RNA2RNA2RNA3 was cloned successfully. Sequence analysis and phylogenetic tree analysis show that, The isolate belongs to CMV subgroup IBB.The prokaryotic expression vector pET-CMV-CPof LJ-10 CMV CP gene was successfully constructed, and the recombinant protein with a molecular weight of about 27 KD was obtained by IPTG induction in E. coli BL21DE3. The specific antiserum of CMV was prepared. Indirect ELISA and Western blotting analysis showed that the titer of the prepared antiserum was 1: 500-1 000. LJ-10 CMV isolated from Xinjiang pepper belonged to CMV subgroup, and the prokaryotic expression vector of LJ-10 CMV CP gene was successfully constructed. The corresponding polyclonal antibody was prepared.
【作者单位】：石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(31460466)
【分类号】：S436.418

【参考文献】

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【共引文献】

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