miR-129-2基因启动子甲基化与喉癌的关系

发布时间：2018-02-27 08:17

  本文关键词： 喉鳞状细胞癌 miR-129-2基因 甲基化　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：喉癌是头颈部最常见的肿瘤,喉癌的发生发展目前尚无明确病因,可能是由下列多种因素共同作用导致,主要有吸烟、饮酒、病毒感染、性激素、职业暴露等有关。喉鳞状细胞癌的发生是个多因素互相作用并共同参与、长期的、复杂的连续过程。尽管人们对喉癌的影响因素和分子机制有了一定的了解,喉癌治疗的五年生存率仍低于50%,喉癌的最常见病理分型为鳞状细胞癌,喉癌的早期诊断及喉癌复发的早期判断对喉鳞癌的治疗及预后至关重要,而目前人们对于相关的分子机理及分子标志的认识还很有限。基因甲基化是表观遗传学中的一种,在哺乳动物细胞中,几乎所有的DNA甲基化都发生在CpG岛胞嘧啶,研究证实,启动子区CpG岛异常甲基化是最多见的生物学标志之一,可能对癌症治疗包括早期癌症检测,表观遗传学肿瘤分类,预测肿瘤预后,治疗干预等有很大帮助。研究发现,miRNAs与肿瘤的发生和发展有密切的关系。喉癌组织中有多种miRNAs异常表达。MicroRNAs是一系列小的非编码RNAs,通过调节目标基因的表达而引起mRNA的表达下降或抑制mRNA转录。miR-129-2是微小RNA中的一员,其基因位于染色体11p11.2。己有研究报道,miR-129-2的异常表达与子宫内膜癌、膀胱癌、胃癌等许多人类肿瘤的发生和发展有关。但是miR-129-2与LSCC关系的研究却较为少见.为了深入理解喉鳞状细胞癌发生及发展的分子生物学机理,寻找鉴定相应的分子生物学指标志,为进一步治疗喉癌奠定基础。本文将对miR-129-2与喉鳞癌的关系作进一步的研究。目的1.研究miR-129-2基因启动子在喉癌组织和匹配癌旁组织,以及喉癌细胞系的甲基化状态。2.研究miR-129-2在喉癌组织的表达水平及miR-129-2甲基化与其表达水平的关系。3.miR-129-2过表达对喉癌细胞增殖的影响。方法采用甲基化敏感性特异性聚合酶链反应(msre-qpcr)的方法测定喉癌细胞系hep-2细胞和29对喉癌组织和癌旁组织中mir-129-2基因的甲基化水平。每一标本的hm(甲基化强度)≥10%定义为发生甲基化。0%hm10%定义为非甲基化。采用荧光定量pcr方法测定喉癌患者癌组织及匹配的癌旁组织中mir-129-2基因的mrna表达水平,以β-actin作为内参基因。通过测定样本中目的基因mir-129-2模板的ct值来反应模板的含量。对每一个样本,用Δct(ctmir129-2-ctβ-actin)值表示目的基因与内参基因间的ct差值。应用去甲基化药物分析甲基化对喉癌细胞中mir-129-2基因表达的影响。最后利用mtt实验在喉癌细胞系中验证mir-129-2对肿瘤相关特性的影响。结果1.荧光定量pcr检测甲基化结果结果显示,mir-129-2启动子区在喉癌细胞系hep-2细胞中发生了甲基化。在喉癌组织中mir-129-2甲基化频率为58.62%(17/29),在癌旁组织未发生mir-129-2甲基化.2.mir-129-2在喉癌组织及癌旁组织的表达水平喉癌组织中mir-129-2表达水平低于癌旁组织(p0.05).3.喉癌细胞系去甲基化处理结果hep-2细胞系在去甲基化和去乙酰化药物处理后与空白对照相比,mir-129-2的表达明显增高。4.mtt实验结果hep-2细胞中过表达mir-129-2基因后,与转入空载质粒对比,细胞的生长明显受到抑制。结论1.mir-129-2在喉癌组织和喉癌细胞系有明显的甲基化。2.mir-129-2在喉癌组织表达降低。3.mir-129-2的表达降低与基因启动子甲基化有关。4.miR-129-2基因过表达可抑制细胞增殖,说明miR129-2在喉癌中起抑癌基因的作用。
[Abstract]:The expression of miR - 129 - 2 in laryngeal squamous cell carcinoma is closely related to the occurrence and development of laryngeal squamous cell carcinoma .

【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.65
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本文编号：1541868