大豆Kti基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建及转化

发布时间：2018-03-05 16:40

  本文选题：大豆　切入点：Kti基因　出处：《中国油料作物学报》2017年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor,Kti)是大豆品质的主要营养抑制因子之一,培育低Kti含量的大豆品种是提升大豆品质的关键。本研究采用RT-PCR技术克隆得到大豆Kti基因的核心保守序列,并构建成种子特异性表达的、具有Kti基因反向重复结构的RNAi载体,利用农杆菌介导法侵染大豆品种吉林30子叶节,通过潮霉素筛选和PCR检测,获得4株转基因阳性植株。RT-PCR检测表明,构建的种子特异性RNAi载体可以在转基因植株的种子中特异表达,且Kti基因表达量均有降低;通过胰蛋白酶抑制剂活性检测发现,转基因大豆籽粒中胰蛋白酶抑制剂活性平均降低了77.5%。为进一步评价RNAi技术对大豆Kti基因的表达调控效果奠定良好基础。
[Abstract]:Soybean Kunitz trypsin inhibitor (trypsin inhibitor Kti) is the main nutritional quality of soybean inhibitor of soybean varieties cultivation of low Kti content is the key to enhance the quality of soybean. This research adopts RT-PCR technology cloned core conserved sequence of soybean Kti gene, and constructed the seed specific expression vector of RNAi, with the reverse repeat Kti gene structure, using Agrobacterium tumefaciens infecting soybean cultivar Jilin 30 cotyledon node, through hygromycin selection and PCR detection, we obtained 4 transgenic positive plants showed that.RT-PCR, a construction of specific RNAi vector can be specifically expressed in transgenic plant seeds, and the Kti gene expression was significantly reduced; by detecting the activity of trypsin inhibitor found that transgenic soybean seeds trypsin inhibitor activity reduces the average 77.5%. for further evaluation of RNAi technology on Soybean The effect of Kti gene expression regulation lay a good foundation.

【作者单位】： 吉林农业大学农学院;吉林市农业科学院;
【基金】：吉林省科技发展计划项目(20130522082JH,20140101148JC) 吉林农业大学校内启动基金(2015007) 吉林市科技局项目(20162003)
【分类号】：S565.1

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