PchsA驱动的烟草orf25基因表达载体构建及遗传转化

发布时间：2018-03-22 17:43

  本文选题：烟草　切入点：orf基因　出处：《核农学报》2016年08期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为研究orf25基因的功能及其与烟草雄性不育性的相关性,通过PCR方法从质粒p UC57-Pchs A中扩增了花特异性启动子Pchs A,并以其取代植物表达载体p BI121中的组成型启动子Ca MV35S,然后将orf25基因插入到Pchs A启动子下游,构建由Pchs A启动子驱动的orf25基因表达载体,测序结果显示植物表达载体p BI121-Pchs A-orf25构建成功。将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,采用根癌农杆菌介导法遗传转化雄性不育烟草MS革新3号,共获得76株转基因烟草植株,经PCR鉴定,转基因阳性植株为18株,转化率为23.7%。研究结果证明目的基因orf25已整合到烟草基因组中,为进一步探究该基因的功能及其与烟草雄性不育性的关系奠定了基础。
[Abstract]:To study the function of orf25 gene and its correlation with male sterility in tobacco, The floral specific promoter Pchs A was amplified from the plasmid p UC57-Pchs A by PCR method, and replaced the constitutive promoter Ca MV35Sin the plant expression vector p BI121. Then the orf25 gene was inserted into the downstream of the Pchs A promoter. Orf25 gene expression vector driven by Pchs A promoter was constructed. Sequencing results showed that the plant expression vector p BI121-Pchs A-orf25 was successfully constructed. The expression vector was introduced into Agrobacterium tumefaciens LBA4404. A total of 76 transgenic tobacco plants were obtained by Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation of male sterile tobacco MS Jianyuan 3, and 18 transgenic positive plants were identified by PCR. The results showed that the target gene orf25 had been integrated into the tobacco genome, which laid a foundation for further exploring the function of the gene and its relationship with tobacco male sterility.
【作者单位】： 江西农业大学农学院/作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室/江西省作物生理生态与遗传育种重点实验室;赣州市烟草科学研究所;湖南农业大学生物安全科学技术学院/植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室;江西农业大学园林与艺术学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31260350,31301388) 江西省教育厅科技计划项目(GJJ13275)
【分类号】：S572;Q943.2

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