重组酶介导的等温扩增技术在转基因检测中的应用

发布时间：2016-11-05 13:27

  本文关键词：转基因作物安全性评价与商品化前景分析，由笔耕文化传播整理发布。

《中国农业科学院》 2014年

重组酶介导的等温扩增技术在转基因检测中的应用

徐潮  

【摘要】：转基因产品的不断涌现引起了社会公众对其安全性的广泛关注。目前我国尚未批准任何一种主粮转基因作物，但是转基因水稻的扩散情况时有发生。为了保护消费者的知情权和选择权，迫切需要建立一种快速简便的检测方法，用于加强转基因产品的安全管理。近年来核酸等温扩增技术得到了不断的发展，它可以摆脱传统的PCR仪，在短时间内得到准确的检测结果。重组酶等温扩增技术（recombinase ploymerase amplification, RPA）是基于重组酶聚合酶介导的扩增原理，模拟体内DNA复制的酶反应过程，对DNA模板进行扩增，可在39℃左右的恒温条件下，20分钟内完成扩增反应。结合DNA快速提取技术，可使转基因作物在野外快速检测中具有广泛的应用前景。本研究主要建立了一种RPA快速检测方法和一种基于磁珠法的DNA快速提取技术，其研究内容和结果如下： 1. RPA等温扩增技术用于转基因检测研究：本研究选取了几种转基因检测中的常用靶标原件，如CaMV35S启动子、nos终止子、HPT基因以及Bt基因等，建立了RPA的凝胶和荧光快速检测方法。结果证实，基于探针检测的荧光RPA方法具有较高的灵敏度，可以稳定检测到100个分子拷贝数。同时荧光RPA方法适用性强，可以用于不同转基因作物的成分检测。15-25分钟内便可以得到稳定、可靠的检测结果。 2.磁珠快速提取植物DNA方法的建立：本研究利用三种便携式DNA提取装置，通过对提取条件的优化，开发出植物总DNA快速粗提取方法。该方法可以在室温条件下，20分钟内完成不同植物DNA的提取。结果证实磁珠法快速提取植物基因组DNA可以用于PCR检测，同时还可以对0.1%的转基因玉米MON810进行品系特异性检测。后续研究进一步结合RPA荧光检测技术，，成功的对转基因水稻TT51-1进行了nos终止子和Bt基因成分检测，建立了适用于野外检测的转基因作物快速精准检测方法。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：Q78
【目录】：

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  本文关键词：转基因作物安全性评价与商品化前景分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：165276