跨界基因沉默菌株的快速构建及对靶标基因干扰能力的检测

发布时间：2018-03-24 10:36

  本文选题：siRNA传递　切入点：跨界基因沉默菌株　出处：《湖南师范大学自然科学学报》2017年05期

【摘要】："跨界基因沉默"是一种利用大肠杆菌在哺乳动物细胞中传递小干扰RNA并引起基因沉默的新颖技术,具有实用、稳定和低成本等优点.该技术通过构建一种能转录出短发夹RNA(shRNA)的大肠杆菌,而这种大肠杆菌产生的shRNA能靶向哺乳动物细胞中的特定基因,从而引发RNA干扰(RNAi).本文用RecA同源重组的方法将跨界基因沉默质粒的工作元件快速地整合到大肠杆菌的染色体DNA上,构建了跨界基因沉默菌株.通过吖啶橙染色实验证明了跨界基因沉默菌株能够入侵哺乳动物细胞,最后Western blot结果表明跨界基因沉默菌株可以对靶标基因产生干扰作用.该技术的完善将进一步促进工程菌的研发和利用.
[Abstract]:"Transboundary gene silencing" is a novel technique that uses Escherichia coli to transmit small interfering RNA and cause gene silencing in mammalian cells. The technique is based on the construction of a Escherichia coli that transcribes short hairpin RNAs that produce shRNA that targets specific genes in mammalian cells. In this paper, the working elements of transborder gene silencing plasmids were quickly integrated into the chromosome DNA of E. coli by RecA homologous recombination. The transborder gene silencing strain was constructed, and it was proved by acridine orange staining that the transborder gene silencing strain could invade mammalian cells. Finally, the results of Western blot showed that the transborder gene silencing strain could interfere with the target gene, and the improvement of the technique would further promote the development and utilization of engineering bacteria.
【作者单位】： 湖南师范大学生命科学学院动物多肽药物创制国家地方联合工程实验室;湖南中医药大学医学院;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(30972624) 湖南省教育厅科学研究项目(15C0840) 湖南省生物发育工程及新产品研发协同创新中心(20134486)
【分类号】：Q78

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