柔嫩艾美耳球虫两种表面抗原基因的原核表达与鉴定

发布时间：2018-03-26 23:01

  本文选题：柔嫩艾美耳球虫　切入点：表面抗原　出处：《动物医学进展》2017年07期

【摘要】：为进一步研究柔嫩艾美耳球虫表面抗原蛋白,应用RT-PCR从柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子总RNA扩增表面抗原基因SAG19(Q70CD0)和SAGfm(U6L233),与pGEM-T easy载体连接,扩增目的片段后分别双酶切扩增产物与pET-28a(+),连接转化至BL21后,诱导表达,分别获得两种重组蛋白。SDSPAGE结果表明,两种重组蛋白的分子质量均为32ku,为包涵体蛋白形式。分别以感染柔嫩艾美耳球虫的鸡血清和重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的多克隆抗体作为一抗,经Western blot分析,结果表明重组蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。通过对这两种表面抗原基因的研究,为基因工程疫苗的研究提供一定的理论依据。
[Abstract]:In order to further study the surface antigen protein of Eimeria tenella, the surface antigen genes SAG19, Q70CD0) and SAGfmU6L233G were amplified from the total RNA of the second generation of Eimeria tenella by RT-PCR and ligated with pGEM-T easy vector. After amplification of the target fragment, the amplified product was digested with pET-28a (pET-28a) and transformed into BL21, then induced to express, and two kinds of recombinant protein 路SDS-PAGE were obtained, respectively. The molecular weight of the two recombinant proteins is 32ku. they are in the form of inclusion body proteins. The polyclonal antibodies obtained from chicken serum infected with Eimeria tenella and recombinant proteins immunized with New Zealand white rabbits were used as primary antibodies, respectively, and analyzed by Western blot. The results showed that the recombinant protein had good immunogenicity and antigenicity.
【作者单位】： 中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室/农业部动物寄生虫病学重点开放实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(31272607)
【分类号】：S852.723

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