新疆沙冬青AnGolS1克

发布时间：2018-03-28 09:34

  本文选题：番茄　切入点：新疆沙冬青　出处：《沈阳农业大学》2016年硕士论文

【摘要】：番茄作为蔬菜栽培中的第一大作物,其适宜的温度范围为13～33℃。在我国设施番茄栽培中,冬春季节的低温成为影响番茄产量与质量的重要限制因子。而普通番茄中抗低温种质资源匮乏,本试验针对从生长在极端低温环境中的新疆沙冬青幼苗低温诱导差减抑制杂交库中分离到的肌醇半乳糖苷合成酶基因EST片段(命名为AnGolS1)利用RACE方法,获得了AnGolS1全长序列(GenBank登录号：GU942748),分析了基因及其编码蛋白的特性,研究了低温下该基因的表达模式,并在此基础上,将该基因转入栽培番茄中,以期提高栽培番茄对低温的抗性。论文的主要结论如下：(1)根据pET30a(+)具有HIS标签的特性,利用酶切连接的方法构建了pET30a(+)-AnGolS1重组质粒；利用IPTG诱导AnGolS1融合蛋白表达,Ni+树脂纯化融合蛋白并用来催化底物反应；通过HPLC分析不同反应时间产物肌醇半乳糖苷的含量,AnGolS1催化底物反应非常迅速,推测AnGolS1很可能是一个快速反应酶并且酶活性有效时间为40min。(2)利用qRT-PCR技术分析不同胁迫下幼苗根、茎及叶中AnGolS1表达量变化,结果显示：AnGolS1基因仅在低温胁迫下高效表达,尤其是茎中高达334.5倍；而在干旱和高盐胁迫下并没有明显的上调表达变化,这说明AnGolS1仅是一个低温诱导基因。(3)低温处理新疆沙冬青幼苗,对根、茎、叶分别取样并进行石蜡包埋和切片；构建探针质粒并合成DIG-labeling探针,进行ISH原位杂交实验。光学显微镜下观察发现：低温胁迫下,茎中束中形成层细胞有非常明显的杂交信号,而周围木质部、韧皮部和皮层等细胞却并不明显；同时,根和叶片木质部周围也存在比较明显的杂交信号,这些结果说明茎束中形成层细胞很可能担负着AnGolS1的合成、转运和协调作用。(4)根据Gateway转基因技术要求构建转基因重组质粒并转化农杆菌,农杆菌介导侵染番茄子叶,抗性培养基培育愈伤组织获得番茄幼苗；利用PCR扩增及活体荧光检测鉴定阳性转基因植株,最终获得了25株AnGolS1转基因番茄T0代植株,其中有4株可能是多拷贝植株,为下一步研究番茄抗寒性提供了重要的实验材料。
[Abstract]:Tomato, as the largest crop in vegetable cultivation, has a suitable temperature range of 13 ~ 33 鈩，

本文编号：1675752