水貂白细胞介素-4基因的克

发布时间：2018-03-31 19:20

  本文选题：水貂　切入点：白介素-　出处：《中国畜牧兽医》2017年01期

【摘要】：为了获得高纯度的白细胞介素-4(IL-4)蛋白,对分离得到的水貂外周血淋巴细胞经植物血凝素(PHA)诱导后,提取淋巴细胞总RNA,根据GenBank中登录的雪貂IL-4基因序列,设计并合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得了水貂IL-4基因序列全长399bp,编码132个氨基酸,与雪貂氨基酸序列同源性高达99.2%,与熊猫、犬同源性均为90.0%。将编码成熟蛋白基因构建到原核表达载体pProEX-HTb,IPTG诱导后,SDS-PAGE及Western blotting结果显示,IL-4表达产物为15ku的包涵体蛋白。通过His-Trap HP亲和层析预装柱变性、复性洗脱可获得高纯度的重组IL-4蛋白。本试验为水貂IL-4基因的进一步研究奠定了基础。
[Abstract]:In order to obtain high purity interleukin-4 (IL-4) protein, the peripheral blood lymphocytes of mink were induced by phytohemagglutinin (GenBank). Specific primers were designed and synthesized according to the sequence of ferret IL-4 gene registered in GenBank. The full-length mink IL-4 gene was amplified by RT-PCR, encoding 132 amino acids, with 99.2 amino acid sequence homology with panda. The protein encoding mature protein gene was constructed into prokaryotic expression vector pProEX-HTbTG-induced by SDS-PAGE and Western blotting. The results of SDS-PAGE and Western blotting showed that the expression product of IL-4 was the inclusion body protein of 15ku. The precolumn denaturation was performed by His-Trap HP affinity chromatography. High purity recombinant IL-4 protein was obtained by renaturation and elution, which laid a foundation for further study of mink IL-4 gene.
【作者单位】： 吉林农业大学动物科学技术学院;中国农业科学院特产研究所;
【基金】：吉林省科技发展计划项目(20140520172JH);吉林省科技发展计划项目(20140307002NY、20140204072NY)
【分类号】：S865.22;Q78

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