弓形虫ATG6基因敲除虫株的构建及其生长特性鉴定

发布时间：2018-04-12 11:22

  本文选题：敲除 + ATG　； 参考：《中国预防兽医学报》2017年11期

【摘要】：酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m Cherry)虫株,以检测Tg ATG6的亚细胞定位情况。通过CRISPR/Cas9技术制备Tg ATG6基因缺失虫株,采用流式细胞术对该虫株的生长特性进行检测。实验结果显示,Tg ATG6基因在进化关系上与植物来源的ATG6同源关系较近。Tg ATG6在虫体内呈弥散分布,经16 h饥饿诱导后,该蛋白在弓形虫体内发生聚集。经序列分析显示,成功获得了两种Tg ATG6基因缺失虫株(ΔTg ATG6-1和ΔTg ATG6-2)。在ΔTg ATG6-2虫株中,Tg ATG6基因开放阅读框的593~612位点之间插入了226 bp外源序列,而在ΔTg ATG6-2中,不能够有效扩增靶序列,表明两种突变虫株的Tg ATG6基因均被有效插入失活。此外,该基因的缺失可能影响了虫株侵入宿主细胞的能力。Tg ATG6基因缺失株的成功制备为进一步研究Tg ATG6蛋白功能奠定了基础。
[Abstract]:Yeast ATG6 protein is a component of phosphatidyl alcohol 3 kinase PI3K) complex I, which promotes the formation of autophagy bodies at the beginning of autophagy.The TG ATG6 gene deletion strain was prepared by CRISPR/Cas9 and the growth characteristics of the strain were detected by flow cytometry.The results showed that the phytogenetic homology of TG ATG6 gene was close to the ATG6 homology of plant origin. The result showed that the Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii protein accumulated after 16 h starvation induced by Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii).Sequence analysis showed that two strains (螖 TG ATG6-1 and 螖 TG ATG6-2) of TG ATG6 gene deletion were successfully obtained.A 226bp exogenous sequence was inserted between the 593n612 locus of TG ATG6 gene in 螖 TG ATG6-2 strain, but the target sequence could not be amplified effectively in 螖 TG ATG6-2, indicating that the TG ATG6 gene of both mutant strains was effectively inserted inactivated.In addition, the deletion of the gene may affect the ability of the insect strain to invade host cells. The successful preparation of the deleted strain of TG ATG6 gene may lay a foundation for the further study of the function of TG ATG6 protein.
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
【基金】：黑龙江省自然科学基金(c2015063、201507-201807)
【分类号】：S852.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 井长龙;鸽弓形虫病的诊治报告[J];黑龙江畜牧兽医;2000年04期

2 苟元刚;犬弓形虫病的诊断与防治[J];中国兽医杂志;2000年11期

3 李天营,肖鹏,肖猛;犬弓形虫病的诊断与治疗[J];广东畜牧兽医科技;2000年02期

4 洪雷;牛弓形虫病[J];中国动物检疫;2000年04期

5 李天营,肖鹏;犬弓形虫病的诊断与治疗[J];中国兽医杂志;2001年02期

6 艾小生;猪急性神经型弓形虫病的诊治[J];中国兽医杂志;2001年12期

7 徐慧中,胡银云;某猪场暴发弓形虫病的诊治[J];中国动物检疫;2001年11期

8 陈敏;规模猪场暴发弓形虫病的报告[J];福建畜牧兽医;2002年05期

9 沈杰;我国寄生虫学界对弓形虫病认识上的飞跃[J];中国兽医寄生虫病;2004年02期

10 王绍琛;犬弓形虫病的诊治[J];福建畜牧兽医;2004年05期

相关会议论文 前10条

1 朱引洁;吴文学;贺国强;;弓形虫病的诊断现状[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

2 李辉;张健;;一例犬弓形虫病的诊断与治疗[A];中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形虫病的流行的新趋势[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

4 崔平;秦建华;方素芳;;河北省动物弓形虫病流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

5 蔺智兵;张厚双;曹杰;周勇志;李国清;周金林;;弓形虫real-time PCR检测方法的建立和初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

6 杨娜;穆名杨;李红魁;何建斌;;中国东北地区鸡源弓形虫的流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2012年

7 刘晶;蔡进忠;于晋海;夏兆飞;林德贵;刘群;;几种动物弓形虫病血清流行病学的初步调查[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

8 王权;蒋蔚;荆振宇;陈永军;杨康;宋宁宁;崔常勇;;五种中药体外抗弓形虫抑制效果的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

9 巩薇;卫礼;王吉;贺争鸣;邢瑞昌;;实验小鼠弓形虫检测方法的建立及应用[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年

10 陈西岐;刘秀兰;张克功;于德顺;;猫弓形虫病的诊治[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

相关重要报纸文章 前7条

1 李水源;当前猪场弓形虫病的防控[N];中国畜牧兽医报;2013年

2 临城县畜牧局 李路民;猪得弓形虫病 吃了猫的亏[N];河北科技报;2002年

3 王志海 邵芹;犬弓形虫病[N];中国畜牧报;2003年

4 邢台市兽医院 邢兰君 高社朝;猪高烧不退 没准是弓形虫病[N];河北科技报;2002年

5 刘延年;家畜弓形虫病的防治[N];中国畜牧水产报;2001年

6 记者 焦玉海;大熊猫“锦意”死于弓形虫病感染[N];中国绿色时报;2014年

7 胡成波;夏秋季谨防猪三种多发病[N];吉林农村报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 龚国华;上海城区犬、猫弓形虫病流行病学调查及药物治疗的研究[D];南京农业大学;2010年

2 尹青;弓形虫Δbag1Δku80株的构建及其作为猫弓形虫病疫苗候选株的免疫原性、安全性和效力的评价[D];中国农业大学;2015年

3 徐鹏;弓形虫新毒力基因TgMAPK1表达特性及其初步功能研究[D];吉林农业大学;2015年

4 张步彩;泰州地区猪弓形虫血清流行病学调查及中药治疗急性感染弓形虫小鼠效果的研究[D];扬州大学;2015年

5 杨鸣发;弓形虫RH株脯氨酰氨氨基肽酶特征与功能性研究[D];东北农业大学;2016年

6 张伟超;TALEN和CRISPR技术在弓形虫致病机制研究中的应用[D];华中农业大学;2016年

7 李木子;弓形虫半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用机制[D];中国农业大学;2017年

8 周春雪;弓形虫Ⅱ型虫株感染小鼠后血清及脑组织代谢组学的研究[D];中国农业大学;2017年

9 张东林;弓形虫病分子诊断方法及弓形虫分离株耐药性的研究[D];华中农业大学;2008年

10 周永华;弓形虫慢性感染大鼠模型的建立及其在学习记忆能力影响研究中的应用[D];南京农业大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 杨晓宇;重组弓形虫TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保护力的评价[D];中国农业科学院;2015年

2 蔡玉峰;猫弓形虫抗体ELISA检测方法的建立与评价[D];吉林农业大学;2015年

3 闫晓月;弓形虫棒状体蛋白ROP7的生物信息学分析、原核表达及组织学定位[D];吉林农业大学;2015年

4 赵东岳;弓形虫B1等基因Real-time PCR与截短SAG2基因克隆、表达及ELISA建立[D];福建农林大学;2013年

5 徐颖;弓形虫棒状体蛋白38的序列变异及免疫保护作用研究[D];安徽农业大学;2014年

6 刘思嘉;弓形虫CDPK1-EF基因的克隆表达及其免疫学特性研究[D];安徽农业大学;2014年

7 何瑜;南京地区鸡场土壤与形虫污染及其部分鸡群感染情况调查[D];南京农业大学;2014年

8 李亚丽;漯河地区猪肉旋毛虫和弓形虫感染调查和技术对策[D];河南工业大学;2015年

9 马依兰·阿布来提;库车县周边地区人、犬、猫感染弓形虫情况的调查研究[D];新疆农业大学;2014年

10 王成双;弓形虫ROP46基因缺失虫株构建及其生物学特性分析[D];黑龙江八一农垦大学;2016年

，

本文编号：1739515