建兰花叶病毒RdRp基因的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2018-04-14 01:26

  本文选题：建兰花叶病毒 + RdRp　； 参考：《植物病理学报》2017年03期

【摘要】：采用RT-PCR技术扩增出建兰花叶病毒贵州分离物(CyMV-GZ)的依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因保守序列。测序结果表明:该RdRp基因序列长735 bp,编码245个氨基酸残基。构建原核表达载体pET32a(+)-RdRp,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃以0.3 mmol·L~(-1) IPTG诱导表达分子量约49 kDa重组蛋白。以该重组蛋白为抗原免疫小鼠,制备的抗体效价达1∶204 800。间接ELISA检测显示该多抗与CyMV病叶汁发生特异性免疫反应,而与其他6种同属或不同属病毒叶汁无血清学交叉反应。本实验为进一步研究RdRp的功能以及从分子水平上探讨该病毒的致病机制奠定了基础。
[Abstract]:RT-PCR technique was used to amplify the conserved sequence of the RNA dependent RNA polymerase RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) gene of CyMV-GZ, a Guizhou isolate of Jianlan Mosaic virus.The sequencing results show that the RdRp gene is 735 BP long and encodes 245 amino acid residues.A prokaryotic expression vector pET32a was constructed. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21DDE3H, and the molecular weight of 49 kDa recombinant protein was induced by IPTG at 37 鈩，

本文编号：1747109