RNA干扰大鼠H9c2心肌细胞Hsc70基因条件筛选

发布时间：2018-04-15 07:14

  本文选题：心肌细胞 + RNA干扰　； 参考：《畜牧与兽医》2017年08期

【摘要】：为了研究H9c2心肌细胞RNA干扰的转染条件,筛选结构型热休克蛋白70(Hsc70)干扰序列,采用流式细胞仪和Western blot方法,研究不同剂量比例荧光标记的siRNA(FAM-siRNA)和不同浓度脂质体2000(Lipofectamine 2000)对转染效率的影响,进一步筛选Hsc70 siRNA的最佳沉默序列。结果显示:流式细胞仪试验得出的最佳转染条件为80 nmol/L FAM-siRNA+1.5μL Lipofectamine 2000;Western blot结果表明,Oligo 2、Oligo 3和Oligo 4组中的Hsc70蛋白表达极显著降低(P0.01),其中Oligo 3组的沉默效率最高;转染后48 h收获细胞为最佳转染时间。结果表明:80 nmol/L FAM-siRNA+1.5μL Lipofectamine 2000为最佳转染条件,以Oligo 3为最佳RNA干扰靶基因。
[Abstract]:In order to study the transfection conditions of RNA interference in H9c2 cardiomyocytes, the interference sequence of structural heat shock protein 70 (Hsc70) was screened by flow cytometry and Western blot.The effects of fluorescent labeled siRNA-FAM-siRNAs and liposome 2000(Lipofectamine 2000) on transfection efficiency were studied, and the best silencing sequence of Hsc70 siRNA was screened.The results showed that the optimal transfection conditions were 80 nmol/L FAM-siRNA 1.5 渭 L Lipofectamine 2000 Western blot. The results showed that the expression of Hsc70 protein in Oligo 2 oligo 3 and Oligo 4 groups was significantly decreased, and the silencing efficiency of Oligo 3 group was the highest.The best transfection time was 48 h after transfection.The results showed that 2000 nmol/L FAM-siRNA 1.5 渭 L Lipofectamine 2000 was the best transfection condition and Oligo 3 was the best target gene for RNA interference.
【作者单位】： 福建龙岩学院生命科学学院;南京农业大学动物医学院;
【基金】：农业部公益性行业(农业)专项子项目(201003060-11) 福建龙岩学院博士启动项目(LB2014003)
【分类号】：S852.3

【参考文献】

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【共引文献】

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9 ;急性心梗治疗获重要突破 心肌细胞可以再生[N];中国保险报;2003年

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本文编号：1753062