人IL-24基因原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化

发布时间：2018-04-18 14:56

  本文选题：白细胞介素 + 质粒构建　； 参考：《生物技术通报》2016年02期

【摘要】：构建人白细胞介素24(IL-24)原核表达载体并利用ELP-Intein系统表达纯化可溶性的IL-24蛋白。通过PCR扩增不含信号肽的人IL-24基因,将IL-24基因插入p ET-ELP-Intein质粒构建重组表达载体p ET-ELP-Intein-IL-24。将重组质粒转化至E.coliBLR(DE3),20℃下经IPTG诱导表达。利用ELP蛋白在不同温度下发生相变的特点和Intein蛋白的自切割反应纯化可溶性IL-24蛋白,将纯化得到的IL-24蛋白进行Western blot鉴定。用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测IL-24蛋白的生物学活性。成功构建了重组表达载体p ET-ELP-Intein-IL-24,第一次通过原核表达方法表达并纯化出了可溶性的IL-24蛋白。Western blot检测显示目的蛋白能与IL-24抗体特异性结合,表明纯化出的蛋白确实为IL-24蛋白。细胞凋亡检测实验证明IL-24蛋白能显著地诱导hep G2细胞发生凋亡。
[Abstract]:The prokaryotic expression vector of human interleukin-24 (IL-24) was constructed and the soluble IL-24 protein was expressed and purified by ELP-Intein system.The human IL-24 gene without signal peptide was amplified by PCR, and the IL-24 gene was inserted into p ET-ELP-Intein plasmid to construct the recombinant expression vector pET-ELP-Intein-IL-24.The recombinant plasmid was transformed into E. coli BLRD3 and expressed at 20 鈩，

本文编号：1768845