加工番茄SlAGO4A基因过表达及干扰载体构建与遗传转化

发布时间：2018-04-20 12:52

  本文选题：加工番茄 + SlAGOA　； 参考：《生物技术》2017年06期

【摘要】：[目的]构建加工番茄SlAGO4A基因过表达及干扰载体,获得相应的转基因番茄植株。[方法]利用PCR技术从番茄c DNA文库中获得2 727 bp的加工番茄SlAGO4A基因。构建SlAGO4A基因的过量表达载体35S:SlAGO4A。以获得的SlAGO4A基因为模板,获得了SlAGO4A PIWI的220 bp的片段,构建SlAGO4A基因的RNAi干扰载体RNAi-PIWI,通过农杆菌介导的遗传转化,获得SlAGO4A过表达及干扰转基因番茄阳性植株,并利用实时荧光定量PCR(QRTPCR)技术检测过表达番茄阳性植株中的SlAGO4A基因的表达水平。[结果]经PCR鉴定获得5株独立转化的里格87-5干扰转基因加工番茄株系,获得6株独立转化的里格87-5过量表达转基因加工番茄株系,其6株SlAGO4A基因过表达的阳性植株的表达量均有不同程度的上调。[结论]为阐明SlAGO4A基因在加工番茄抗病毒信号通路中的功能奠定基础。
[Abstract]:[objective] to construct the overexpression and interference vector of SlAGO4A gene of processed tomato and obtain the transgenic tomato plants. [methods] 2 727 BP SlAGO4A gene was obtained from tomato c DNA library by PCR. The overexpression vector of SlAGO4A gene 35 S: SlAGO4A was constructed. The 220bp fragment of SlAGO4A PIWI was obtained by using the obtained SlAGO4A gene as template. The RNAi interference vector RNAi-PIWI of SlAGO4A gene was constructed, and the SlAGO4A overexpression and interfering transgenic tomato positive plants were obtained by Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation. The expression level of SlAGO4A gene in tomato positive plants was detected by real-time fluorescence quantitative PCR PCR. [results] five independent transformed riger 87-5 transgenic tomato lines were identified by PCR, and 6 independent transformed riger 87-5 transgenic tomato lines were obtained. All of the 6 SlAGO4A gene overexpression positive plants were up-regulated in varying degrees. [conclusion] this study lays a foundation for elucidating the function of SlAGO4A gene in processing tomato antiviral signaling pathway.
【作者单位】： 石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(“番茄OPA3-like基因的功能研究”,No.31460466)
【分类号】：Q943.2

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本文编号：1777818