耐多药结核分枝杆菌中耐利福平表型与基因型的研究

发布时间：2018-04-21 05:49

  本文选题：耐多药结核分枝杆菌 + 利福平　； 参考：《遵义医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:了解耐多药结核分枝杆菌中耐利福平表型与基因型的关系,以及结核分枝杆菌耐利福平机制。方法:对结核病患者临床标本进行抗酸染色涂片、细菌培养、菌型鉴定及药敏试验,筛选耐多药结核分枝杆菌并获取其耐药表型数据。提取菌株DNA,分别对耐利福平相关基因rpo B、rpo C、rpo A及rpo Z基因编码区全长进行PCR扩增和测序,获得菌株耐药基因型信息。测序结果在NCBI数据库中与结核分枝杆菌标准菌株H37Rv序列进行比对,并分析结果。结果:本研究的71例耐多药结核分枝杆菌菌株中,65例(91.5%)发生耐利福平相关的基因突变,包括rpo B、rpo C和rpo A多个基因的突变,无rpo Z基因突变,6例无上述4个基因突变。65例突变株均出现rpo B基因突变,其中63例(88.7%)发生在rpo B基因中利福平耐药决定区(RRDR)内,以531(54.9%)、526(14.1%)及516(9.9%)位点突变为主;2例单独出现RRDR外基因突变;63例中有7例出现RRDR内与RRDR外联合突变。65例突变株中,27例(38.0%)发生rpo C基因突变,3例(4.2%)发生rpo A基因突变。rpo C及rpo A基因突变的菌株均同时在rpo B基因发生突变,即双基因联合突变。本研究共发现11种结核分枝杆菌耐利福平相关基因新型突变,包括7种rpo B基因突变:CCG126TCG、CTG511CCC、TCG574TAC、TCG663GCG、GGC747GAC和GTG250GCG/GTC251TAC联合突变;4种rpo C基因突变:GAG49GCG、GGC332TGC、CCG434ACG及GCC710AC。结论:耐多药结核分枝杆菌中耐利福平机制主要与rpo B基因(特别是RRDR内)突变有关,而rpo B基因RRDR外部分区域、rpo C及rpo A基因可能作为rpo B基因补偿基因。本研究发现11个耐利福平相关基因新型突变,为进一步研究结核分枝杆菌耐利福平机制奠定实验室基础。
[Abstract]:Aim: to investigate the relationship between rifampin resistance phenotype and genotype in multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis and the mechanism of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis. Methods: acid fast staining smear, bacterial culture, bacterial type identification and drug sensitivity test were used to screen the multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis and obtain the phenotypic data of drug resistance. The full-length coding region of rifampin-resistant gene rpo rpo C rpo A and rpo Z gene were amplified by PCR and sequenced respectively, and the genotype information of drug resistance was obtained. The sequencing results were compared with the H37Rv sequence of Mycobacterium tuberculosis standard strain in NCBI database and the results were analyzed. Results: in this study, 65 of 71 multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis strains developed rifampin-resistant gene mutations, including mutations in rpo rpo C and rpo A genes. No mutation of rpo Z gene was found in 6 cases. All the 65 mutant strains had rpo B gene mutations, of which 63 cases (88. 7%) occurred in rifampicin resistance determining region (RRDR) of rpo B gene. 531% 54.9% and 516% 9. 9) mutation of rpo A gene in 2 out of 63 cases with RRDR gene mutation in 7 out of 63 cases, rpo C gene mutation occurred in 27 cases (38.0%) and rpo A gene mutation. RPO C gene mutation occurred in 3 cases (4. 2%). All the strains with rpo A gene mutation were mutated in rpo B gene at the same time. That is, the combination of two genes mutation. In this study, a total of 11 novel mutations in rifampicin-resistant genes of Mycobacterium tuberculosis were identified, including 7 mutations in the rpo B gene: TCG574TAC747GAC and GTG250GCG/GTC251TAC combined with TCG574TAC747GAC and GGC332TGCG434ACG and GCC710AC. Conclusion: the mechanism of rifampicin resistance in multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis is mainly related to the mutation of rpo B gene (especially in RRDR), while the region of rpo B gene RRDR, rpo C and rpo A gene may be used as rpo B gene compensators. In this study, 11 novel rifampicin-resistant gene mutations were found, which laid a laboratory foundation for further study of rifampin resistance mechanism of Mycobacterium tuberculosis.
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R52

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本文编号：1781179