河北省出血热疫区鼠类携带汉坦病毒基因型别及病原特征研究

发布时间：2018-04-26 08:06

  本文选题：汉坦病毒 + 肾综合征出血热　； 参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:了解肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)疫区鼠类携带汉坦病毒(Hantavirus,HV)的基因特点和变异情况。揭示河北省出血热疫区鼠类携带HV的基因型别,为防治HV相关疾病提供依据。方法:1根据河北省HFRS的流行强度和地区分布情况,选择石家庄某县级市、保定某县级市、沧州某县、邯郸某县、唐山某县和承德某县6个县区为重点研究区域;2分别在6个区域的居民区和野外采用夹夜法捕鼠,总结各区域HV宿主动物的密度及鼠种构成;3鼠肺匀浆处理,并提取总RNA;4采用Taq Man探针法多重荧光定量RT-PCR技术对8种HV分两组进行检测,汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多布拉伐(Dobrava virus,DOBV)为第一组,图拉病毒(Tula virus,TULV)、黑河渠病毒(Black creek canal virus,BCCV)、安第斯病毒(Andes virus,ANDV)、辛诺毕斯病毒(Sin Nombre virus,SNV)为第二组;5采用一致简并杂合寡核苷酸引物(Consensus Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primers,CODEHOP)RT-PCR检测鼠肺中HV的基因型别;6挑选核酸检测结果为HV阳性的鼠肺标本,进一步利用针对Gc基因片段而设计的SEOV特异性引物进行PCR扩增,对扩增产物进行核酸序列测定;7对序列进行同源性分析,构建系统发育树。结果:1 2015~2016年两年6个区域的野外平均鼠密度为0.44%,居民区平均鼠密度为2.77%,居民区鼠密度高于野外(χ2=317.995,P0.001)。2015~2016年冀南地区(石家庄某县级市、邯郸某县)的平均鼠密度为5.36%,冀中地区(保定某县级市、沧州某县)的平均鼠密度为2.58%,冀东地区(唐山某县)鼠密度为1.92%,冀北地区(承德某县)鼠密度为6.18%。经卡方检验,可认为冀北和冀南地区的鼠密度高于冀中和冀东地区(χ2=336.29,P0.001)。居民区春季鼠密度高于秋季或基本与秋季持平。2 2015~2016年6个区域共捕鼠1228只,经分类鉴定隶属于4属4种,分别为大鼠属的褐家鼠1043只,小家鼠属的小家鼠179只,仓鼠属的大仓鼠5只,姬鼠属的黑线姬鼠1只。居民区的优势鼠种为褐家鼠,占居民区总捕获数的84.12%;野外优势鼠种为褐家鼠,占野外总捕获数的92.50%。总体来看,河北省6个区域的优势鼠种为褐家鼠。3对1228份标本进行Taq Man探针法多重荧光定量RT-PCR检测,共检出35份HV阳性。4对1228份标本采用CODEHOP体系进行PCR扩增,其中29份鼠肺标本出现特征条带。5鼠带毒率为2.85%,毒种均为SEOV。其中居民区共检测鼠肺1108份,阳性33份,鼠带毒率为2.98%;野外共检测鼠肺120份,阳性2份,鼠带毒率为1.67%,居民区鼠带毒率高于野外(χ2=37.78,P0.05)。35份HV阳性鼠肺标本中褐家鼠29份,小家鼠5份,带毒率分别为2.78%、2.79%,还有1份为黑线姬鼠(由于标本量太小不宜计算带毒率)。小家鼠和野栖型的黑线姬鼠携带了SEOV,证明该毒种出现了“宿主溢出”现象。在不同区域方面,冀南地区带毒率为2.13%,冀中地区带毒率为0.34%,冀东地区带毒率为17.81%,冀北地区带毒率为5.88%。经卡方检验结果显示(χ2=2513.13,P0.001):冀东地区鼠带毒率高于其他地区。6对35份HV阳性鼠肺标本采用针对Gc基因片段的SEOV型特异性引物进行PCR扩增,8份标本的扩增产物在预期位置出现了目的条带。7对整理获得的7份L片段进行核酸扩增及同源性比较,7份标本之间核酸序列同源性为94.0%~98.3%,7份标本与浙江省SEOV的ZT10株及韩国SEOV的80-39株的同源性较高。L片段系统发育树显示7份标本均处于SEO型HV的分支上,亲缘关系较近,由此可判断7份标本均属于SEO型HV。8份Gc片段核酸扩增及同源性比较结果显示,8份标本间核酸序列同源性为98.1%~99.7%,与SEOV型北京市Bj HD01株,河北省HBQ20株、HBQ43株,山东省GM04-38株、ZB8株处在同一进化分支,亲缘关系较近,均属于S3亚型。结论:1河北省出血热疫区居民区的鼠密度及鼠带毒率高于野外。褐家鼠是河北省出血热疫区的优势鼠种。2河北省出血热疫区宿主动物携带的HV基因型为SEO型,未发现其他型别HV。3河北省出血热疫区宿主动物携带的SEOV基因亚型较单一,仅为S3亚型。4河北省非优势鼠种小家鼠和黑线姬鼠均携带SEO型HV,存在“宿主溢出”现象。
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本文编号：1805168