gpd1基因莱茵衣藻表达载体构建及农杆菌介导转化莱茵衣藻

发布时间：2018-05-02 16:00

  本文选题：莱茵衣藻 + 农杆菌转化法　； 参考：《西北大学学报(自然科学版)》2017年01期

【摘要】：甘油3-磷酸酰基转移酶基因(gpd1)可以调控植物脂质代谢中关键酶甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)的活性,能促进植物脂质合成。本研究以莱茵衣藻FACHB-479为受体,通过克隆酵母gpd1基因,构建莱茵衣藻的农杆菌双元表达载体pRI-Ble-GPD1,首次以农杆菌介导法将携带在农杆菌LBA4404的gpd1基因转移到FACHB-479基因组。在含有10μg/m L博莱霉素的TAP平板筛选得到抗性藻体细胞。经过分子生物学PCR及RTPCR鉴定,获得转基因藻FACHB-GPD。尼罗红染色法鉴定分析FACHB-GPD细胞中油脂含量增高1.3~1.52倍。该研究表明农杆菌介导外源gpd1基因在莱茵衣藻FACHB-479基因组的过表达能增加脂肪酸含量,从而提高其产油能力。
[Abstract]:Glycerol 3-phosphate transferase gene (gpd1) can regulate the activity of glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH), a key enzyme in plant lipid metabolism, and promote plant lipid synthesis. In this study, the bivariate expression vector pRI-Ble-GPD1 was constructed by cloning the yeast gpd1 gene from Chlamydomonas rhinella FACHB-479, and the gpd1 gene carrying Agrobacterium LBA4404 was transferred to the FACHB-479 genome by Agrobacterium-mediated method for the first time. TAP plate containing 10 渭 g / mL bleomycin was used to screen resistant algal somatic cells. The transgenic algae FACHB-GPDwas obtained by molecular biological PCR and RTPCR identification. The oil content in FACHB-GPD cells was 1.52 times higher than that in FACHB-GPD cells by Nile red staining. This study indicated that the overexpression of exogenous gpd1 gene in FACHB-479 genome of Chlamydomonas rhinorrhoeae could increase the fatty acid content and increase its oil production ability by Agrobacterium tumefaciens (Agrobacterium tumefaciens).
【作者单位】： 西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室/陕西省生物重点实验室/西北大学生命科学学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31270411,31572665) 陕西省科技厅社会发展攻关计划基金资助项目(2012K12-01-02) 陕西省教育厅专项基金资助项目(12JK0827)
【分类号】：Q943.2

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本文编号：1834561