梅花鹿CGI99基因RNAi慢病毒载体的构建及其对鹿茸干细胞增殖的影响

发布时间：2018-05-07 05:53

  本文选题：鹿茸 + RNAi　； 参考：《生物技术通报》2016年08期

【摘要】：利用慢病毒介导的基因沉默体系,对梅花鹿生茸区骨膜干细胞(AP)中CGI99基因进行RNA干扰,并初步研究该基因对细胞增殖的影响。设计出1条针对梅花鹿CGI99基因的shRNA序列与载体质粒pLVTHM连接,之后与pSPAX2、pMD2.G质粒共转染HEK 293t细胞,获得重组慢病毒,感染AP细胞;通过荧光定量PCR检测CGI99基因的下调水平;通过MTT实验检测CGI99基因沉默对AP细胞增殖影响。基因的表达水平大幅度下调,干扰效率达到70.8%;MTT实验的数据曲线趋于一致。结果表明,成功构建了针对梅花鹿CGI99基因的RNAi载体并干扰了CGI99基因在AP细胞中的表达,且初步确定CGI99基因对AP细胞的增殖并无显著影响。
[Abstract]:Using lentivirus-mediated gene silencing system, the RNA interference of CGI99 gene in periosteum stem cells (APs) of sika deer was carried out, and the effect of the gene on cell proliferation was preliminarily studied. A shRNA sequence targeting sika deer CGI99 gene was designed and ligated with vector plasmid pLVTHM, then co-transfected with pSPAX2pMD2.G plasmid into HEK 293t cells to obtain recombinant lentivirus and infect AP cells, and the down-regulation level of CGI99 gene was detected by fluorescence quantitative PCR. The effect of CGI99 gene silencing on the proliferation of AP cells was detected by MTT assay. The level of gene expression was significantly down-regulated, and the interference efficiency reached 70.8%. The data curve of MTT assay tended to be consistent. The results showed that the RNAi vector targeting sika deer CGI99 gene was successfully constructed and interfered with the expression of CGI99 gene in AP cells, and it was preliminarily confirmed that CGI99 gene had no significant effect on the proliferation of AP cells.
【作者单位】： 中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室;
【基金】：吉林省科技发展计划项目(20140204010YY) 吉林省自然科学基金项目(20140101139JC)
【分类号】：S825

【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 路晓;孙红梅;张伟;李春义;;以鹿茸为模型探索软骨组织发生[J];中国农业科技导报;2015年04期

2 韩庆功;郑玉姝;;RNAi技术在抗甲型流感病毒中的研究进展[J];生物技术通报;2014年12期

3 郭倩倩;王大涛;褚文辉;鲁晓萍;秦欣;赵海平;李春义;;利用慢病毒表达载体干扰梅花鹿角柄骨膜细胞P21基因[J];吉林农业大学学报;2014年01期

4 张登禄;韩金祥;崔亚洲;周小艳;;胰腺癌转移相关基因C14orf166的真核表达及其蛋白相互作用的蛋白质组学筛选[J];中国医药生物技术;2010年03期

5 孙红梅;李春义;杨福合;褚文辉;赵海平;鲁小平;;鹿茸骨化机制的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2009年15期

相关博士学位论文 前2条

1 宋家升;H5N1亚型禽流感病毒对家鸭致病力分子机制的研究[D];中国农业科学院;2010年

2 郭静会;胰腺癌血清蛋白质指纹图谱及CCR7与胰腺癌淋巴结转移相关性研究[D];复旦大学;2010年

【共引文献】

相关期刊论文 前9条

1 路晓;孙红梅;褚文辉;张伟;李春义;;梅花鹿CGI99基因RNAi慢病毒载体的构建及其对鹿茸干细胞增殖的影响[J];生物技术通报;2016年08期

2 刘松啸;张爱武;翟晶;黄杰;王光辉;鞠贵春;;精饲料补充料对生茸期梅花鹿营养物质消化率及产茸性能的影响[J];吉林农业大学学报;2016年02期

3 张伟;褚文辉;路晓;董振;王权威;李春义;;梅花鹿Thymosin beta 10基因RNAi慢病毒载体的构建及其对鹿茸干细胞增殖的影响[J];吉林农业大学学报;2016年01期

4 路晓;孙红梅;张伟;李春义;;以鹿茸为模型探索软骨组织发生[J];中国农业科技导报;2015年04期

5 张爱武;翟晶;范敏;刘松啸;付晶;鞠贵春;;双阳梅花鹿初角茸、二杠茸中氨基酸组成及含量分析[J];经济动物学报;2015年04期

6 黄杰;张爱武;林伟欣;刘松啸;翟晶;鞠贵春;;不同精料补充料对育成梅花鹿母鹿生产性能的影响[J];经济动物学报;2015年02期

7 杨春;刘振;路晓;李春义;;鹿茸干细胞MSAP分析技术体系的建立及引物筛选[J];吉林农业大学学报;2015年04期

8 张恒;矫继峰;黄金彪;赵金香;;塔里木马鹿最佳收茸期探究[J];畜牧与兽医;2014年12期

9 赵金香;张恒;矫继峰;陶大勇;;鹿茸Ca~(2+)含量与塔里木马鹿收茸期的关系研究[J];黑龙江畜牧兽医;2014年18期

相关博士学位论文 前1条

1 管雪婷;野鸟源LPAIV、HPAIV对家鸭和野鸭的感染特性分析及AIV传播方式的研究[D];东北林业大学;2014年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 赵辰;黄伟;梁熙;廖军义;周年;胡宁;赵智;简长春;;Smad7在Sox9增强BMP2成软骨效应中的作用[J];第三军医大学学报;2015年02期

2 李婷;李沐;孟星宇;刘宁;胡薇;;microRNA介导的IGF1基因沉默对鹿茸软骨细胞增殖的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2013年11期

3 张宝;黄克勇;郭劲松;吴娴波;李凌;朱利;万成松;赵卫;;H7N9病毒的来源和重组模式[J];南方医科大学学报;2013年07期

4 张宏伟;;H7N9禽流感的病毒特征及其对人类健康的潜在威胁[J];第二军医大学学报;2013年06期

5 杨帅;朱闻斐;舒跃龙;;猪流感病毒概述[J];病毒学报;2013年03期

6 范鸣;;Alnylam公司与葛兰素史克公司合作应用VaxiRNA技术提高疫苗生产能力[J];药学进展;2012年05期

7 孙红梅;杨福合;邢秀梅;刘琳玲;赵海平;李春义;;鹿茸再生干细胞成骨诱导(微粒体)培养体系的建立[J];吉林农业大学学报;2010年06期

8 张国海;王启钊;张景红;许瑞安;;microRNA调控的靶向性病毒载体在基因治疗中的应用[J];生物工程学报;2010年06期

9 张登禄;韩金祥;崔亚洲;周小艳;;胰腺癌转移相关基因C14orf166的真核表达及其蛋白相互作用的蛋白质组学筛选[J];中国医药生物技术;2010年03期

10 张登禄;韩金祥;崔亚洲;周小艳;;C14orf166异位表达对Hela细胞增殖与迁移能力的影响[J];中华肿瘤防治杂志;2010年10期

，

本文编号：1855663