不同膳食脂肪酸调节大鼠肝脏SREBP-1c基因表达影响NAFLD发生发展

发布时间：2018-05-09 00:11

本文选题：膳食脂肪酸 + 固醇调节元件结合蛋白-1c　；参考：《第三军医大学》2016年硕士论文

【摘要】：在发达国家,NAFLD已是存在于一般人群中最普遍的肝脏疾病。据估计,它将在未来十年内成为肝移植最常见的适应症。NAFLD可伴有中度(即脂肪变性)到重度(即脂肪性肝炎和纤维化)肝损害并影响所有年龄段人群。肥胖及其并发症(如代谢综合征、2型糖尿病和心血管疾病)的群体中发展成NAFLD的风险增加。至今,尚未发现治疗的有效方法,目前防治NAFLD的主要措施仍然是通过能量限制和增加体力活动以控制体重。不幸的是,NAFLD病人治疗失败往往是因为难以坚持而致。有研究表明,日常膳食中不同的脂肪酸构成可能影响NAFLD发生发展,甚至有人提出治疗NAFLD的有效药物可能是主要来源于鱼油的n-3 PUFA。本课题组前期进行的NAFLD病例对照研究发现饱和脂肪酸(主要来源于猪油)是重庆居民发生NAFLD的危险因素,而n-6 PUFA(主要来自玉米油、豆油)是保护因素。尽管病例对照研究没有发现重庆市居民血浆n-3 PUFA水平与NAFLD患病率有关,鱼油的人群干预研究的结果不一致,但鱼油干预对重庆市NAFLD患者是有益的,但是其作用机制还不十分清楚。SREBPs是调控与代谢脂质基因相关表达的关键核转录因子,其功能异常对NAFLD有显著影响。课题组于肝细胞体外实验中发现,不同膳食脂肪酸通过对固醇元件结合蛋白1c亚型的表达和转录活性等方面进行调节,使其对脂肪在肝细胞内不断蓄积的情况产生重要影响。SREBP-1c可能是治疗NAFLD的靶点。在本研究中,对大鼠喂养含10%猪油的饲料用于创建NAFLD模型,探讨不同构成的膳食脂肪酸对大鼠的脂质代谢产生的影响,对大鼠NAFLD发生和发展的影响及其与固醇元件结合蛋白1c亚型的关系,为NAFLD的防治提供理论依据。140只SD大鼠,按所需量,随机数据表法分为5组:NAFLD模型组(n=60)、对照组(n=20)、MUFA组(n=20)、n-6 PUFA组(n=20)和4:1 n-6/n-3 PUFA组(n=20)。完成分组后的日常喂养情况描述如下:每组10只大鼠每周称重一次,第8周时,实施安乐死。按照实验设计分析取出对应部位的肝脏和血液,获取后续研究的相关数据。又将另外50只NAFLD模型组大鼠随机分成5组,分组情况与上述相同,每组10只大鼠。继续喂养8周后,剩余大鼠称重,实施安乐死。按照实验设计分析取出对应部位的肝脏和血液,获取后续研究的相关数据。采用HE染色肝组织切片,观察并半定量分析肝脏细胞的脂肪病理学变化的程度。测定各组大鼠肝脏和血清中脂质含量。选用实时定量聚合酶链式反应法、蛋白质免疫印迹法检测SREBP-1c和脂肪酸合成酶的蛋白及m RNA表达。总结本实验的主要结论如下:1.不同膳食脂肪酸对大鼠体质量的影响不同膳食脂肪酸饲养8周或16周,就体质量的增长而言,NAFLD模型组显著高于对照组和其它膳食脂肪酸组(P0.05)。除NAFLD模型组以外,其余各组间体质量无差异(P0.05)。NAFLD建模成功的大鼠换成其它脂肪酸继续饲养8周,各组大鼠体质量均无统计学差异。2.不同膳食脂肪酸对大鼠脂代谢的影响与对照组相比,NAFLD组大鼠血清和肝脏中的总胆固醇和甘油三酯显著增加,与NAFLD组比较,富含PUFA各组大鼠血清和肝脏TC、TG显著降低,差异均有统计学意义。NAFLD建模成功的大鼠换成其它脂肪酸继续饲养8周后,各组大鼠血清TC无明显差异。模型变4:1 n-6/n-3 PUFA组大鼠血清TG、肝脏TC含量明显低于模型组(P0.05),其余各组血清TG、肝脏TC差异不明显(P0.05)。就肝脏TG含量而言,与模型组相比,模型变对照组、模型变n-6PUFA组、模型变4:1 n-6/n-3PUFA组均显著降低(P0.05)。3.不同膳食脂肪酸对大鼠NAFLD发生发展的影响NAFLD模型组用含10%猪油的饲料喂养大鼠,8周后,在光镜下发现了大鼠肝脏细胞沉积有大量的脂肪滴,表明已成功构建其活体动物模型。为了对不同膳食脂肪酸是否有预防NAFLD发生效果进行评价,含10%橄榄油、10%玉米油、8%玉米油+2%鱼油的饲料饲养大鼠8周,发现富含PUFA的油脂喂养大鼠后肝脏脂肪变性的程度较轻,尤其是4:1 n-6/n-3 PUFA组大鼠肝脏脂肪沉积最少。NAS与HE结果基本一致。继续喂养至16周,各组大鼠肝脏病理变化的趋势与8周时基本相同。为了进一步评价n-3 PUFA对NAFLD发展的治疗作用,实验设计把建模成功的剩余大鼠按之前的分组方法再分为5组,用不同饲料继续喂养8周后,模型变对照组肝内出现大量的变性脂肪细胞,明显的HB、小叶内炎症和严重纤维化。而模型变对照组,特别是模型变4:1 n-6/n-3 PUFA组的肝细胞脂肪变性程度减轻,小叶内炎症明显改善。说明膳食中添加n-3 PUFA干预或者转变为低脂膳食,对改善NAFLD均有积极意义。4.不同膳食脂肪酸对大鼠SREBP-1c和FAS基因表达的影响NAFLD组大鼠肝脏固醇元件结合蛋白1c亚型、脂肪酸合成酶的蛋白表达水平与对照组相比,NAFLD组表达显著增加,m RNA表达水平也增加,且两基因趋势一致(P0.05)。与模型组相比,富含多不饱和脂肪酸的4:1n-6/n-3和n-6组,这两组肝脏固醇元件结合蛋白1c亚型、脂肪酸合成酶的m RNA和蛋白表达水平,显著下降(P0.05)。说明膳食中的饱和脂肪酸上调大鼠肝脏SREBP-1c、FAS的基因表达,而在高脂膳食情况下,PUFA尤其是n-3 PUFA可以下调大鼠肝脏SREBP-1c、FAS的基因表达。上述结果提示,高脂膳食尤其是高饱和脂肪酸膳食显著上调大鼠肝脏SREBP-1c和FAS基因表达,促进肝脏脂肪合成。诱导NAFLD的发生发展,而低脂膳食或富含PUFA尤其是n-3 PUFA的膳食可下调大鼠肝脏SREBP-1c、FAS的基因表达,抑制肝脏脂肪合成与蓄积,调控非酒精性脂肪肝的发生,也可延缓NAFLD的发展。
[Abstract]:In this study , it has been found that different dietary fatty acids can affect the development of the fatty liver transplantation . However , it is not clear that the effect of different dietary fatty acids on the lipid metabolism in the population of Chongqing is not consistent . In order to evaluate the effect of different dietary fatty acids on lipid metabolism in rats , there was no significant difference between the serum levels of serum and liver TC and TG in rats after 8 weeks . The model changed 4 : 1 n - 6 / n - 3 . The model changed 4 : 1 n - 6 / n - 3 PUPUC . The results suggested that high fat diet , especially the high saturated fatty acid diet , could down - regulate the gene expression of hepatic stevibp - 1c and FAS .

【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5

【参考文献】