羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达
本文选题：羊传染性脓疱病毒 + CEV基因 ； 参考：《动物医学进展》2017年03期
【摘要】：为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物,以CEV基因组为模板,采用PCR扩增出1条大小为867bp的CEV112基因,将其连接到pMD20-T载体上,构建pMD20-T-CEV112重组质粒,转化到大肠埃希菌(E.coli)DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112,转化到E.coli BL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明,成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达了CEV112基因,表达的融合蛋白大小约36ku,且主要以包涵体形式存在,为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。
[Abstract]:In order to express the CEV112 gene of sheep infectious pustule virus, a pair of primers were designed according to the sequence information of CEV112 gene in GenBank. A CEV112 gene of 867bp was amplified by PCR using CEV genome as template. The recombinant plasmid of pMD20-T-CEV112 was constructed by ligation into pMD20-T vector and transformed into E. coli DH5 伪 competent cells. The plasmid was extracted and identified by restriction endonuclease digestion. After identification, the recombinant plasmid pET28a-CEV112 was constructed and transformed into E.coli BL21 (DE3) competent cells. The expression was induced by IPTG, and the expression product was analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The results showed that the prokaryotic expression vector of pET-28a-CEV112 was successfully constructed, and the CEV112 gene was expressed in E.coli BL21DE3. The fusion protein was about 36ku. the fusion protein mainly existed in the form of inclusion body, which laid a foundation for the further study of the function of CEV112 gene.
【作者单位】： 海南大学热带农林学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室;
【基金】：海南省重大科技计划项目(ZDKJ2016017-01)
【分类号】：S852.654
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 邓宇;;羊传染性脓疱病毒半套式PCR检测方法的建立及应用[J];动物医学进展;2014年08期
2 赵从民;;羊传染性脓疱病的防治[J];科技致富向导;2002年04期
3 李倬,王廷璞,卢建雄;羊传染性脓疱基因工程苗的基础研究概述[J];西北民族学院学报(自然科学版);1999年04期
4 关中田;;山羊传染性脓疱的病理分析与防治措施[J];民营科技;2008年06期
5 成伟伟;张克山;刘永杰;孔汉金;尚佑军;刘湘涛;刘磊;;羊传染性脓疱病毒基因组结构和主要基因功能研究进展[J];动物医学进展;2014年07期
6 邵洪泽;刘云志;程荣华;付殿国;魏艳华;;羊传染性脓疱病毒的分离与鉴定[J];吉林畜牧兽医;2006年11期
7 迟源;王好;钱爱东;;羊传染性脓疱病毒的分离鉴定[J];中国预防兽医学报;2010年09期
8 鲁燕;申之义;关平原;希尼尼根;;羊传染性脓疱病毒内蒙古分离株(OV/nm-05)GIF基因的克隆及序列分析[J];畜牧与饲料科学;2012年04期
9 黎摄儿;赵苗苗;崔成;黎满香;;羊传染性脓疱病毒湖北分离株CBP二级结构及其细胞表位的预测[J];中国动物传染病学报;2014年03期
10 ;[J];;年期
相关会议论文 前5条
1 曾铭珠;唐翠英;;羊传染性脓疱及防制[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（下）[C];2003年
2 邵洪泽;毛文智;李琳;刘云志;程荣华;姚新华;;羊传染性脓疱诊断方法的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
3 赵魁;李吉达;贺文琦;成军;高丰;;羊传染性脓疱病毒早期感染宿主细胞差异表达基因的筛选与鉴定[A];2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集[C];2012年
4 孔汉金;张克山;刘永杰;尚佑军;吴斌;刘湘涛;;羊传染病脓疱研究展望[A];2013中国羊业进展[C];2013年
5 廖海洋;张广谋;;黄羊传染性脓疱综合防治体会[A];2012年福建省畜牧兽医学术年会论文集[C];2012年
相关重要报纸文章 前10条
1 夏道伦;羊传染性脓疱病的防控措施[N];中国畜牧兽医报;2013年
2 任县畜牧局 杜立乾 温存良;羊传染性脓疱的诊治[N];河北科技报;2014年
3 昌黎县畜牧发展局 赵静;羊传染性脓疱病的防治[N];河北科技报;2014年
4 河南省畜牧局高级畜牧师 赵国明;羊传染性脓疱病的防治[N];河南科技报;2002年
5 江苏省农科院兽医所 王芳 林继煌;羊传染性脓疱[N];江苏农业科技报;2005年
6 沈慧;羊传染性脓疱病治疗验方[N];云南科技报;2006年
7 刘家欣;羊传染性脓疱病一例[N];中国畜牧报;2002年
8 梁巍;羊传染性脓疱病[N];中国畜牧报;2002年
9 王宪超;羊传染性脓疱[N];江苏农业科技报;2003年
10 ;羊传染性脓疱病[N];中国畜牧兽医报;2009年
相关博士学位论文 前2条
1 郭良兴;吉林省羊传染性脓疱病流行病学调g捌涿鸹钜呙绲难兄芠D];吉林大学;2012年
2 邵洪泽;羊传染性脓疱病毒FIL基因克隆表达及分子生物学检测方法的建立与初步应用[D];吉林农业大学;2013年
相关硕士学位论文 前10条
1 王玲玲;羊传染性脓疱病毒VIR蛋白对宿主细胞p53和IFN-α的调控[D];中国农业科学院;2016年
2 苏高莉;羊传染性脓疱病毒农安株的分离鉴定及其免疫原蛋白的表达与纯化[D];吉林大学;2013年
3 张冰冰;羊传染性脓疱病毒感染羔羊细胞免疫应答变化规律的研究[D];吉林大学;2011年
4 杨海波;新疆石河子地区羊传染性脓疱病毒的分离鉴定及其119基因缺失株研究[D];石河子大学;2014年
5 李旭东;羊传染性脓疱实时荧光定量PCR方法的建立[D];内蒙古农业大学;2015年
6 张秀海;平阴县羊病调查及防制技术研究[D];山东农业大学;2007年
7 毕经影;羊传染性脓疱病病毒胶体金快速诊断试纸条的研制[D];吉林大学;2015年
8 包英夫;抗羊传染性脓疱病毒免疫球蛋白可变区多样性研究[D];吉林大学;2014年
9 张倩;羊传染性脓疱病毒B2L基因重组山羊痘病毒的构建及初步评价[D];石河子大学;2014年
10 张学禹;羊传染性脓疱病毒VEGF基因的克隆及PCR诊断方法的研究[D];吉林农业大学;2011年
，本文编号：1875968
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/1875968.html
