口疮病毒020基因的克

发布时间：2018-05-23 13:04

  本文选题：羊口疮病毒 + 基因　； 参考：《安徽农业大学学报》2017年05期

【摘要】：羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病。020基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白。根据Gen Bank中020基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因。然后将其亚克隆至p ET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒p ET-32a-ORF-020。鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清。SDS-PAGE结果表明,ORFV 020基因在体外获得正确表达,大小约37 k Da。Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与020蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性。
[Abstract]:Sheep mouth ulcer is caused by orf virus ORFV. The epitheliophilic infectious disease. 020 gene is an important enzyme activity regulating protein of the virus. According to the sequence of 020 gene in Gen Bank, primers were designed and the target gene was amplified from the infected material of ORFV-F10 strain. Then it was subcloned into prokaryotic expression vector pET-32a (), and the recombinant expression plasmid pET-32a-ORF-020 was constructed. After the correct identification, the BL21 receptive cells were transformed and IPTG induced expression was carried out. The expressed products were analyzed by SDS-PAGE and Western-blot. Finally, the purified 020 protein was immunized with BALB/c female mice, and the polyantiserum. SDS-PAGE results showed that the ORFV020 gene was correctly expressed in vitro, and the size was about 37 k Da.Western-blot. The prepared polyclonal antibody serum can react specifically with 020 protein.
【作者单位】： 安徽农业大学动物科技学院;安徽华澳生物技术有限公司;
【基金】：国家自然科学基金(31602063) 安徽省自然科学基金(1508085QC60) 安徽农业大学稳定和引进人才科研项目(yj2015-16);安徽农业大学大学生科技创新基金项目共同资助
【分类号】：S852.65

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本文编号：1924852