质粒介导的耐多药大肠埃希菌qnr基因的分布研究

发布时间：2018-05-30 22:20

本文选题：质粒 + 耐多药　；参考：《西南医科大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的:自从20世纪90年代末期第一次发现qnr基因后,全国各地就陆陆续续有报道称发现其同源性基因及相应亚型,且各国家、各地区的检出情况及同源性基因的分布情况各不相同。本次研究的目的在于了解泸州地区大肠埃希菌的药敏情况,及首次探讨qnrB、qnrS、qnrA基因的分布情况和耐药特征,以更好的为临床用药提供依据。方法:1.实验菌株的准备:将临床分离的155株细菌复苏于LB培养基上,挑选生长良好的菌落1-2个接种于TSB肉汤营养液中培养18-24小时,菌液浑浊后置于4℃冰箱保存,以供后续实验所用。2.PCR检测:根据细菌TIANprep Mini Plasmid Kit使用说明书,对已培养的细菌进行质粒DNA的提取,使用3对已合成的引物及相关反应液,配制25ul反应体系,进行PCR扩增反应。反应结束后将产物用于琼脂糖凝胶电泳,在凝胶DNA成像仪下观察,将阳性条带产物图照相及保存。将条带清晰的PCR阳性产物送上海生工公司测序。3.药物敏感性试验:即K-B法(纸片扩散法),对155株大肠埃希菌进行药敏试验分析,观察其对如下抗生素的耐药情况:阿米卡星(AMK)、萘啶酸(NA)、庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)、莫西沙星(MXF)、左氧氟沙星(LEV)、头孢噻肟(CTX)、诺氟沙星(NOR)、头孢他啶(CAZ)、亚胺培南(IPM)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)、头孢噻肟/克拉维酸(CTC)、头孢他啶/克拉维酸(CAC)。4.ESBLs筛选试验:用CTX及CTC、CAZ及CAC抗生素纸片做初筛和确认试验,结果的判断参照NCCLS(美国临床实验室标准化委员会)的标准。加克拉维酸及不加克拉维酸的抑菌环直径相差大于等于5mm,即可确认为esbls菌株。结果:1.pcr结果:检出qnr阳性菌共29株(20.65%)。其中qnra检出4株,占2.58%;qnrb检出19株,12.26%;qnrs检出9株,占5.81%。其中3株细菌同时检出不同型qnr基因,分别是qnra及qnrb、qnrb及qnrs、qnra及qnrs。2.药敏实验结果:1)155株大肠埃希菌对mxf及imp敏感率达100%;对scf敏感性较高,达98.71%,对na、caz、gen、ctx、amk、scf、cip、lev、nor的耐药率分别为70.97%、29.03%、49.03%、58.06%、2.58%、1.29%、51.61%、33.54%、54.84%。2)耐多药菌株占28.39%、双耐菌株占25.16%,单耐菌株占26.45%,全敏菌株占20%。耐多药模式表型以耐caz/ctx+gen+na/nor/cip为主,共计39株,占耐多药菌的88.64%;双耐模式表型以耐na/nor/cip+gen为主,共计23株,占双耐菌的58.97%;单耐表型以耐na/cip/nor为主,共计25株,占单耐菌的60.98%。3.esbls检出情况:155株细菌中,共检出esbls(+)菌总计97株,占62.58%。耐多药菌株中,97.72%的菌株为esbls(+)菌,双耐药菌株中esbls(+)占89.74%,单耐药菌株中esbls(+)占46.34%。4.qnr基因的分布情况:1)qnr阳性菌株与阴性菌株对11种抗生素(包括喹诺酮类药物)耐药率的比较中,其耐药率无显著差别(p值均大于0.05,统计学无意义)。2)qnr基因对esbls(+)菌及esbls(-)菌的影响的比较中,其p=0.001,差异有统计学意义。qnr阳性菌株主要分布在双耐及耐多药菌株中,达72.41%,统计学处理,p值小于0.05,差异有统计学意义。结论:1.泸州地区临床分离的实验菌株对三类常用抗生素的耐药情况仍较普遍,且其耐多药、双耐药情况较常见,但均较过去有所改善。2.泸州地区临床分离的大肠埃希菌esbls(+)菌检出率达62.58%,且主要分布在耐多药菌及双耐药菌株中。3.泸州地区的大肠埃希菌qnr基因检测率达20.65%,且主要位于ESBLs(+)菌中。4.qnr基因主要分布在耐多药及双耐药模式菌株中。
[Abstract]:Objective : To study the susceptibility of Escherichia coli in Luzhou area . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . Polymerase chain reaction was carried out on 155 strains of Escherichia coli . There were 19 strains of qnrb , 19.03 % , 58.06 % , 25.16 % , 49.03 % , 58.06 % , 2.58 % , 98.71 % , 51.61 % , 33.54 % , 54.84 % respectively . The results showed that the detection rate of esbls ( + ) and esbls ( + ) was 62.58 % .
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5

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