冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN和GRB10DNA甲基化及表达的影响

发布时间：2018-06-18 03:30

  本文选题：精液冷冻 + DNA甲基化　； 参考：《山东大学学报(医学版)》2017年01期

【摘要】：目的探讨精液冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN、GRB10甲基化状态和mRNA表达的影响。方法将20份人精液标本平行分为2组:新鲜组(n=20)和冷冻组(n=20)。采用计算机辅助精子分析(CASA)进行两组精液的常规参数检测;Percoll密度梯度离心法纯化精子,SNRPN、GRB10基因的甲基化率采用Sequenom DNA测序分析;SNRPN、GRB10基因的mRNA表达采用qRT-PCR定量分析。结果冷冻组精子浓度、精子活力、前向运动精子百分比均低于新鲜组(P0.05),冷冻组不活动精子百分比显著高于新鲜组(P0.05);冷冻组精子SNRPN mRNA表达显著低于新鲜组(P0.05);冷冻组精子GRB10启动子区亚片段检测的-902Cp G位点(即转录起始点上游989 bp处)的甲基化率显著下降(P0.05);GRB10 mRNA表达较新鲜组显著升高(P0.05)。结论冷冻复苏过程影响人精子GRB10、SNRPN基因的DNA甲基化和mRNA表达,提示精子库常规使用的精液冻储技术可能改变配子的表观遗传信息,进而调控基因的表达。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of cryopreservation on the methylation and mRNA expression of human sperm imprinting gene SNRPNN GRB10. Methods Twenty human semen specimens were divided into two groups: fresh group and frozen group. The methylation rate of spermatozoa SNRPNN GRB10 gene purified by Percoll density gradient centrifugation was analyzed by Sequenom DNA sequencing and quantitative analysis of mRNA expression of SNRPNU GRB10 gene by qRT-PCR. Results sperm concentration and sperm motility in cryopreservation group. The percentage of forward motile sperm was lower than that of fresh group, the percentage of inactive sperm in frozen group was significantly higher than that in fresh group, the expression of SNRPN mRNA in frozen group was significantly lower than that in fresh group, and the subfragment of GRB10 promoter region in frozen group was -902CpG. The methylation rate of the locus (989 BP upstream of the transcriptional start point) was significantly decreased. The expression of P0.05 GRB10 mRNA was significantly higher than that of the fresh group. Conclusion cryopreservation affects DNA methylation and mRNA expression of SNRPN gene in human spermatozoa, suggesting that cryopreservation technique used in sperm bank may change the epigenetic information of gametes and then regulate gene expression.
【作者单位】： 宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室宁夏生殖与遗传重点实验室;宁夏医科大学总医院宁夏人类精子库;
【基金】：国家自然科学基金(81460243,81560249) 宁夏回族自治区科技攻关项目(2012ZYS239) 宁夏医科大学生殖与遗传基础及临床创新团队人才项目(FGCT201505)
【分类号】：R321

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本文编号：2033852