miR-133b靶向PKM2基因对肺癌A549干细胞增殖及药物敏感性的影响
本文选题:MiR-b + A ; 参考:《中国肺癌杂志》2017年06期
【摘要】:背景与目的已有研究表明miR-133b可抑制肺癌细胞生长,miR-133b表达水平在肺癌组织及患者血清中显著降低,miR-133b通过靶向丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)基因提高鳞癌细胞的放疗敏感性,但其机制尚未明了。本研究通过提取非小细胞肺癌细胞株A549的CD133~+/CD34~+干细胞,研究miR-133b对其增殖及顺铂类药物(cisplatin,DDP)敏感性的影响,探讨miR-133b与PKM2基因的关系,以及它们在肺癌干细胞中的作用。方法使用miRBase和miRNAMap数据库进行miR-133b与PKM2基因的序列比对。应用免疫磁珠分选法从A549细胞中分选出CD133~+/CD34~+肺癌干细胞,流式细胞仪检测纯度。转染miR-133b进入CD133~+/CD34~+细胞,qRT-PCR检测验证miR-133b表达情况,CCK8法检测细胞增殖情况;15μg/mL DDP处理转染miR-133b细胞,检测0 h、12 h、24 h、72 h的细胞凋亡情况;采用Western blot检测PKM2蛋白水平的表达。结果PKM2基因可能为miR-133b的靶基因;流式结果显示CD133~+/CD34~+细胞的纯度为(92.15+4.27)%。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,过表达miR-133b后,miR-133b明显上调,miR-133b抑制表达后,miR-133b明显下调(P0.05)。细胞增殖实验及Western blot结果显示,与对照组相比,miR-133b mimics组细胞的增殖能力显著降低(P0.05),PKM2蛋白水平明显降低(P0.05);而抑制miR-133b表达则明显增加细胞的增殖能力及PKM2蛋白水平(P0.05)。DDP处理12 h后miR-133b mimics组细胞的凋亡持续明显高于对照组(P0.05)。miR-133b mimics+DDP组PKM2蛋白的表达明显低于对照组及miR-133b inhibitor组(P0.05)。结论过表达miR-133b能够通过下调PKM2而抑制肺癌干细胞的生长和增殖,并且可以增强肺癌干细胞对DDP的敏感性。
[Abstract]:Background & AIM previous studies have shown that miR-133b inhibits the expression of miR-133b in lung cancer cells and serum of patients with lung cancer. MiR-133b significantly reduces the radiosensitivity of squamous cell carcinoma cells to radiotherapy by targeting pyruvate kinase M2 (pyruvate kinase isozyme type M2PKM2) gene. But its mechanism is not clear. The aim of this study was to investigate the effects of miR-133b on the proliferation and sensitivity of cisplatin (cisplatin DDP) to non-small cell lung cancer cell line A549. The relationship between miR-133b and PKM2 gene and the role of miR-133b in lung cancer stem cells were investigated. Methods miR-133b and PKM2 gene were sequenced using miRBase and miRNAMap database. CD133 ~ / CD34 ~ lung cancer stem cells were isolated from A549 cells by immunomagnetic bead sorting. The purity of CD133 ~ / CD34 ~ lung cancer stem cells was detected by flow cytometry. The expression of miR-133b in the transfected miR-133b cells was detected by RT-PCR. The proliferation of miR-133b cells was detected by CCK8 method, and the apoptosis of miR-133b cells was detected at 12 h and 24 h and 72 h after transfection by CCK8. The expression of PKM2 protein was detected by Western blot. Results PKM2 gene may be the target gene of miR-133b, flow cytometry showed that the purity of CD133- / CD34~ cells was (92.154.27). QRT-PCR showed that miR-133b overexpressed miR-133b up-regulated miR-133b expression and miR-133b down-regulated (P0.05). The results of cell proliferation assay and Western blot showed that, Compared with the control group, the proliferative ability of mimics group was significantly lower (P0.05), the protein level of PKM2 was significantly decreased (P0.05), while the inhibition of miR-133b expression significantly increased the proliferation ability of cells and the cell apoptosis of miR-133b mimics group treated with miR-133b for 12 h (P0.05). The expression of PKM2 protein in mimics DDP group was significantly lower than that in control group and miR-133b inhibitor group (P0.05). Conclusion overexpression of miR-133b can inhibit the growth and proliferation of lung cancer stem cells by down-regulating PKM2 and enhance the sensitivity of lung cancer stem cells to DDP.
【作者单位】: 重庆医科大学附属医院永川医院检验科;成都市新都区人民医院呼吸内科;
【分类号】:R734.2
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,本文编号:2051440
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