拟南芥开花抑制基因TFL1多克隆抗体的纯化与特异性检测

发布时间：2018-06-23 08:10

  本文选题：TFL + 多克隆抗体　； 参考：《河北农业大学学报》2017年02期

【摘要】：为了获得敏感性和特异性高的TFL1多克隆抗体,本研究构建了GST-TFL1和His-TFL1原核表达载体并转入大肠杆菌表达菌株BL21中。经IPTG诱导和蛋白纯化,成功获得了分子量约为46kD的GST-TFL1和22kD的His-TFL1融合蛋白。利用纯化的融合蛋白His-TFL1作为抗原免疫,获得了TFL1的多克隆抗体血清。抗体血清经偶联了GST-TFL1融合蛋白的纯化基质进行免疫亲和纯化获得了纯化的TFL1多克隆抗体。免疫印迹检测抗体敏感性和特异性发现,纯化后的抗体不仅能特异地识别细菌内纯化的GST-TFL1和His-TFL1融合蛋白,也能与拟南芥中TFL1蛋白发生特异性反应。该研究结果为深入研究TFL1抑制植物开花的分子机制提供了有力的工具。
[Abstract]:In order to obtain high sensitivity and specificity of TFL1 polyclonal antibody, GST-TFL1 and His-TFL1 prokaryotic expression vectors were constructed and transferred into Escherichia coli expression strain BL21. GST-TFL1 and His-TFL1 fusion proteins with molecular weight of about 46kD and 22kD were successfully obtained by IPTG induction and protein purification. Using the purified fusion protein His-TFL1 as antigen, the polyclonal antibody serum of TFL1 was obtained. The purified TFL1 polyclonal antibody was obtained by immuno-affinity purification of the purified matrix of GST-TFL1 fusion protein. Immunoblotting assay showed that the purified antibody could not only specifically recognize the purified GST-TFL1 and His-TFL1 fusion proteins, but also react specifically with TFL1 protein in Arabidopsis thaliana. The results provide a powerful tool for further study on the molecular mechanism of TFL1 inhibiting flowering.
【作者单位】： 华北理工大学生命科学学院/基因组学和计算生物学研究中心;南京农业大学植物保护学院;河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31401212) 河北省自然科学基金(C2014209134)
【分类号】：Q943.2

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本文编号：2056449