新生儿遗传代谢病筛查诊治模式建立及筛查疾病基因研究

发布时间：2018-06-25 16:45

本文选题：新生儿遗传代谢病筛查 + 串联质谱　；参考：《山东大学》2016年博士论文

【摘要】：第一部分串联质谱技术进行新生儿遗传代谢病筛查模式建立目的：新生儿疾病筛查是公认的最有价值的出生缺陷预防的第三级预防措施之一,目前我国新生儿遗传代谢病普遍筛查的病种仅有2-4种,而能够致残的遗传代谢病病种日益增多至千余种,在目前的体系中通过利用国际最先进的串联质潜技术,建立多种氨基酸脂肪酸及有机酸代谢病的筛查方法、截断值,扩大筛查病种至数十种,并明确诊断流程,探索这些疾病的治疗方法,通过流行病学研究与基因分析,研究本地区遗传代谢病的发病情况、发病特点及干预方式。完善筛查网络建立信息化管理,从卫生经济学角度分析该项工作的深刻意义。比较正常新生儿和高危新生儿中发病率是否存在差异,为筛查病种的增加和遗传代谢病诊治标准的建立提供临床依据。方法：自2010年12月至2015年12月,济南市新生儿疾病筛查中心按照知情同意原则对新生儿采集血样进行串联质谱技术筛查,筛查病种为37种氨基酸、有机酸、脂肪酸代谢病,计算单病种以及分类病种筛查阳性率。同时间段收集临床高危儿以及可疑遗传代谢病患儿,通过质谱技术平台明确诊断,计算确诊疾病发病情况,比较与新生儿筛查样本疾病谱及发病情况。结果：应用质谱技术平台,筛查新生儿61702例,筛查阳性1170例,筛查阳性率1.8%,确诊40例阳性患儿。筛查确诊总阳性率1：1542(0.65%o),其中有机酸代谢病两种共23例,氨基酸代谢病三种10例,脂肪酸代谢病三种7例。本中心承担山东全省以及周边省份串联质谱筛查可疑患儿的确诊,故接诊各地转诊初筛阳性患儿较多,另外包括临床高危儿的筛查,2010年12月至2015年12月共2948例,共诊断氨基酸有机酸脂肪酸等代谢病19种145例,阳性率5%,新生儿筛查质谱检测出各种遗传代谢病阳性率1：1500,临床高危儿中确诊各种遗传代谢病1：15。筛查新生儿确诊最多病种为甲基丙二酸症,高苯丙氨酸血症,游离肉碱缺乏症,3甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症；临床高危儿确诊最多病种为甲基丙二酸血症,高苯丙氨酸血症。结论：质谱技术用于新生儿遗传代谢病筛查能够极大扩展筛查病种,济南地区此类遗传代谢病发病率较高,有必要进行新生儿期的普便筛查。通过临床常见发病病种与筛查阳性病种比较,确定本地域发病率最高及危害较大的病种为甲基丙二酸血症、高苯丙氨酸血症。第二部分筛查疾病的基因分析目的：针对串联质谱技术筛查并确诊的阳性病例,建立基因诊断平台。探索这些疾病的治疗方法,通过流行病学研究与基因分析,研究本地区遗传代谢病的发病情况、发病特点及干预方式。方法：经过新生儿遗传代谢病筛查诊断的阳性患儿,通过DNA质谱分析进行基因检测,对临床确诊的先天性甲低,高苯丙氨酸血症,先天性肾上腺皮质增生症,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症,以及串联质谱技术筛查确诊的37种遗传代谢病患儿留取末梢血样4滴,采用DNA试剂盒提取干燥血斑中的DNA,用Nanodrop分光亮度计定量。采用Sequenom公司Typer 4.0软件设计,待测突变位点的PCR扩增引物及单碱基延伸引物,根据NCBI PubMed、OMIM和HGMD数据库所收录文献其公开的基因突变信息纳入标准,筛选了常见11种氨基酸代谢异常基因451种突变以及常见23种有机酸代谢异常及脂肪酸氧化代谢异常基因491种突变。结果：检测355例先天性甲低患儿,大部分无相关基因突变,仅一例发生PAX8基因突变c.155G/C, p.Arg52Pro,且父母双方未携带该突变基因,证实为一代新发突变。高苯丙氨酸血症基因检测140例,其中132例检测出基因突变位点,并和临床诊断相符,10例未检出突变位点,经sanger一代测序后7例测出突变位点,其中5个位点为未报道的新发突变；经蛋白分析预测致病性可疑,可能致病。先天性肾上腺皮质增生症患儿基因检测70例,10例未测出突变位点,5例查出单杂合一个突变位点,1例患儿有三个突变位点但均来源于父方,这些患儿中其中6例经随访后排除诊断,其余患儿仍在随访中。其余54例均测出来源于父方及母方的两个突变位点；葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症,检测35例患儿,6例患儿未测出突变位点,其余均测出并做母亲携带验证。有一例为未报道新发突变。串联质谱技术筛查确诊145例阳性患儿,均检出突变位点,基因检测阳性结果及常见突变位点。结论：遗传代谢病基因检测对疾病的诊断非常重要,并且必须做父母验证才能确保查出基因突变的致病性。本地域筛查病种具有常见突变位点,遗传代谢病的基因型与表型关系密切。
[Abstract]:The first part tandem mass spectrometry was used to establish the screening model of newborn ' s genetic metabolic diseases . free carnitine deficiency , 3 - methyl - 4 - yl - coenzyme A - carboxykinase deficiency ;
In this paper , we used DNA kit to study the genetic diagnosis of 37 patients with congenital hypothyroidism , and to establish a gene diagnosis platform for the diagnosis of congenital hypothyroidism , hyperphenylalaninemia , congenital adrenal cortical hyperplasia , glucose - 6 - phosphate dehydrogenase deficiency , and tandem mass spectrometry .
In the children with congenital adrenal hyperplasia , 70 cases were detected , 10 cases did not detect the mutation sites , 5 cases were heterozygous for one mutation site , 1 case had three mutation sites , but all originated from the parent . Among these , 6 of these children were excluded from the diagnosis after follow - up .
Conclusion : The gene detection of genetic metabolic diseases is very important for the diagnosis of diseases . It is concluded that the gene detection of genetic metabolic disease is very important for the diagnosis of diseases . It is concluded that the gene detection of genetic metabolic disease is very important for the diagnosis of diseases .
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R722.1

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