麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的载体构建及遗传转化

发布时间：2018-06-30 02:24

  本文选题：麻花艽 + β-amyrin合成酶基因　； 参考：《西南农业学报》2017年11期

【摘要】：【目的】本文拟进行麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的载体构建及遗传转化。【方法】首先利用gateway方法进行GsAS2的RNAi载体(pK7GWIWG-GsAS2)和过表达载体(pK7WG2D-GsAS2)的构建,并利用基因枪转化麻花艽胚性愈伤组织,经卡那霉素(Kan)筛选后,进一步用35S启动子引物进行抗性植株总DNA的PCR检测。【结果】获得GsAS2的RNAi阳性植株5株,过表达植株8株,转化频率分别为2.94%和4.00%。对转基因植株进行GsAS2的半定量RT-PCR分析和齐墩果酸的HPLC测定表明:GsAS2的表达在RNAi系中受到较大抑制,其齐墩果酸含量均低于对照(为对照的48.5%~80.7%),而在过表达系中GsAS2则超量表达,且齐墩果酸含量均高于对照(为对照的1.67~2.46倍)。【结论】说明GsAS2的表达与下游产物齐墩果酸的含量关系密切。
[Abstract]:[objective] to construct the vector of GsAS2 of Gentiana macrophylla 尾 -amyrin synthase gene and its genetic transformation. [methods] the RNAi vector (pK7GWIWG-GsAS2) and the overexpression vector (pK7WG2D-GsAS2) of GsAS2 were constructed by gateway. The embryogenic callus of Gentiana macrophylla was transformed by gene gun. After being screened by kanamycin (Kan), the total DNA of resistant plants was detected by using 35s promoter primer. [results] 5 RNAi positive plants and 8 overexpression plants were obtained. The transformation frequency was 2.94% and 4.00% respectively. The semi-quantitative RT-PCR analysis of GsAS2 and the HPLC assay of oleanolic acid in transgenic plants showed that the expression of Oleanolic acid was significantly inhibited in RNAi lines, and the content of oleanolic acid in transgenic plants was lower than that in the control (48.5% of the control), while the overexpression of GsAS2 in the over-expressed lines was higher than that in the control. The content of oleanolic acid was higher than that of the control (1.67 ~ 2.46 times of the control). [conclusion] the expression of GsAS2 was closely related to the content of the downstream product oleanolic acid.
【作者单位】： 莱芜职业技术学院信息工程系;山东大学生命科学院植物细胞工程与种质创新教育部重点实验室;
【基金】：莱芜职业技术学院博士科研启动基金(2015bsky01)
【分类号】：Q943.2;S567.239

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