丹参CYP76AH1转基因毛状根的建立及其蛋白的分离

发布时间：2018-07-02 23:15

  本文选题：蛋白质复合物 + 次生代谢物　； 参考：《中国中药杂志》2017年20期

【摘要】：蛋白质复合物参与植物多种次生代谢物的合成,其分离对阐明植物次生代谢及提高体外催化效率至关重要。该研究构建了过表达丹参酮合成途径关键酶CYP76AH1的转基因毛状根株系,通过Western杂交筛选得到高表达CYP76AH1蛋白的丹参转基因毛状根,并以此作为后续提取丹参酮合成途径中蛋白质复合物的组培材料。通过优化蛋白提取缓冲液中的去污剂种类和浓度,筛选出含0.5%Triton X-100的缓冲液为最佳提取缓冲液,并分离得到相对大量的可溶性CYP76AH1蛋白质。该研究为后续进一步分离纯化与CYP76AH1相互作用的蛋白质复合物奠定了基础,也为深度解析丹参酮合成代谢通路提供思路。
[Abstract]:Protein complexes are involved in the synthesis of many secondary metabolites in plants. The separation of protein complexes is very important to clarify the secondary metabolism of plants and improve their catalytic efficiency in vitro. In this study, transgenic hairy root lines expressing the key enzyme CYP76AH1 of tanshinone biosynthesis pathway were constructed, and the transgenic hairy roots of Salvia miltiorrhiza with high expression of CYP76AH1 protein were obtained by Western blot. It was used as a tissue culture material for the subsequent extraction of protein complexes from tanshinone synthesis pathway. By optimizing the type and concentration of detergent in protein extraction buffer, the buffer containing 0.5 Triton X-100 was selected as the optimal extraction buffer, and a relatively large amount of soluble CYP76AH1 protein was isolated. This study laid a foundation for the further separation and purification of protein complexes interacting with CYP76AH1, and provided a way for deep analysis of the metabolic pathway of tanshinone biosynthesis.
【作者单位】： 中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地;北京中医药大学;
【基金】：国家自然科学基金项目(ZZ2016026) 中央本级重大增减支项目(2060302)
【分类号】：S567.53

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本文编号：2091286