LSP1基因多态性与膀胱癌的关联分析及LSP1在膀胱癌中的表达及意义

发布时间：2018-07-14 21:31

【摘要】：第一部分:LSP1基因多态性rs907611与膀胱癌的相关性分析目的:研究白细胞特异性蛋白1(Leukocyte-specific protein 1,LSP1)单核苷酸多态性rs907611与天津地区汉族人群膀胱尿路上皮癌发病风险的相关性。方法:收集2012年5月至2014年6月在天津医科大学第二医院初次确诊的535例膀胱尿路上皮癌患者的血液及649例对照组人群(与病例组年龄、性别相匹配的正常体检人群)的血液进行研究,提取全血基因组DNA,应用PCR-LDR方法进行基因分型。首先检验分型结果是否遵循HWE平衡定律,然后采用多因素非条件logistic回归检验来分析rs907611基因型与天津汉族人群膀胱癌易感性、分期、分级、吸烟及进展风险的相关性;应用Kaplan-Meier曲线和COX回归模型来分析rs907611基因型与膀胱癌短期复发的相关性。结果:分型结果符合HWE平衡定律(p0.05)。LSP1 rs907611存在三种基因型:野生型(G/G)、突变杂合子(G/A)及突变纯合子(A/A)。以野生型(G/G)基因型为对照,突变纯合子(A/A)人群膀胱癌发病风险明显提高(p=0.036,OR=1.786,95%CI 1.038-3.072),突变型(G/A+A/A)人群中膀胱癌的发病风险也有轻微升高(p=0.049,OR=1.264,95%CI 1.001-1.596);与G等位基因相比,A等位基因与膀胱癌的发病风险存在明显的相关性(p=0.019,OR=1.264,95%CI1.038-1.538)。分层分析结果显示rs907611与膀胱癌分期分级的发病风险没有明显的相关性。另外,结果显示rs907611对吸烟人群膀胱癌的发病风险没有影响。结合随访数据进行分析,没有发现这rs907611与非肌层浸润性膀胱癌的短期复发存在相关性。结论:LSP1基因rs907611位点基因突变可显著增加天津地区汉族人群膀胱癌的发病风险,尤其与低级别、非肌层浸润性膀胱癌的发生关系密切。这一基因并不会影响吸烟患者膀胱癌的发病率,也与天津地区汉族人群膀胱癌的短期复发没有显著地相关性。第二部分:膀胱癌易感位点LSP1 rs907611的功能分析目的:通过研究rs907611多态性位点周围基因的表达量与rs907611基因型的相关性来筛选单核苷酸多态性rs907611的靶基因,从而进一步探讨rs907611增加膀胱癌易感性的作用机制。方法:在UCSC Genome Browser中检索rs907611位点两侧各250kbp范围内的基因(包括DNA、microRNA和lincRNA)。从我实验室膀胱癌标本库中随机选择与rs907611的三种基因型相对应的患者的膀胱癌及癌旁组织标本共24对,其中G/G基因型10对、G/A及A/A基因型各7对,提取组织RNA,应用实时定量Q-PCR的方法检测相应基因的表达情况。结果:在rs907611两侧500kbp范围内共存在21个基因,其中DNA包括KRTAP5-3、KRTAP5-4、KRTAP5-5、KRTAP5-6、IFITM10、SYT8、TNNI2、LSP1、CTSD、TNNT3、HOTS和MRPL23;microRNA包括MIR4298、MIR7847和MIR675;lincRNA包括MRPL23-AS1、FAM99A、FAM99B、H19、Linc01219及Linc01150。Q-PCR结果显示以上所有基因的表达量与rs907611的基因型均没有明显的相关性(p0.05);但是我们发现癌组织中LSP1及MIR7847的表达量明显低于癌旁组织(p0.05),癌组织中H19和MIR675的表达量明显高于癌旁组织(p0.05)。结论:在LSP1基因多态性rs907611位点周围500kbp范围内没有rs907611的靶基因;LSP1及MIR7847在癌组织中明显低表达,而H19和MIR675在膀胱癌组织中明显高表达。第三部分:LSP1在膀胱癌中的表达及意义目的:研究LSP1在膀胱癌中的表达水平,并初步探讨LSP1对膀胱癌细胞的影响。方法:应用免疫组化和western-blot技术检测膀胱癌组织及癌旁正常膀胱黏膜LSP1的表达情况。构建LSP1过表达质粒,转染T24膀胱癌细胞,应用Q-PCR、Western-blot检测转染效果,应用MTT、流式细胞术、划痕实验及Transwell实验检测LSP1对膀胱癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果:免疫组化和Western-blot结果显示LSP1在膀胱癌组织中明显低表达。我们成功构建pcDNA3.1(+)/LSP1过表达质粒并顺利转染T24膀胱癌细胞;MTT结果显示转染LSP1过表达质粒后T24细胞的增殖受到明显的抑制;流式细胞术结果显示出T24细胞中LSP1过表达后细胞凋亡明显增加;划痕实验及Transwell实验结果显示LSP1过表达后,T24细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论:LSP1是一种抑癌基因,它在膀胱癌组织中明显低表达,可以明显抑制膀胱细胞的增殖、迁移和侵袭能力,同时促进膀胱癌细胞的凋亡。
[Abstract]:The relationship between rs907611 genotype and the risk of bladder cancer in Han population in Tianjin was studied by using Kaplan - Meier curves and COX regression models . Conclusion : The mutation of rs907611 locus can significantly increase the risk of bladder cancer in the Han population in Tianjin . The expression of LSP1 in bladder cancer was detected by immunohistochemistry and Western - blot . The results showed that the expression of LSP1 in bladder cancer was significantly lower than that in adjacent tissues ( p < 0.05 ) . Conclusion : LSP1 is a kind of tumor suppressor gene , which can significantly inhibit the proliferation , migration and invasion of bladder cells and promote the apoptosis of bladder cancer cells .
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14

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