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番茄OPA3-like基因的生物信息学分析及原核表达

发布时间:2018-07-15 07:54
【摘要】:[目的]获得高效表达的类视神经萎缩蛋白3(OPA3-like),并分析其生物信息学功能。[方法]利用Vector NTI和ExPASy,Signal P,Plant-mPLoc等在线工具对OPA3-like蛋白基本理化性质、信号肽、跨膜区及亚细胞定位进行分析;构建原核表达载体pET22b-OPA3-like、pET28a-OPA3-like、pET32a-OPA3-like并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE对结果进行验证。[结果]OPA3-like蛋白是不稳定蛋白,含有跨膜区,可能位于叶绿体;原核表达表明,对于同一重组质粒而言,融合蛋白在两种菌中的表达量无明显差别,其中,转化pET28a-OPA3-like可表达20kDa的融合蛋白;转化pET32a-OPA3-like可表达37kDa的融合蛋白,且主要都以包涵体形式存在,转化pET22b-OPA3-like无融合蛋白的表达。[结论]转化pET32a-OPA3-like的表达菌可以高效表达融合蛋白(37 kDa),有利于进一步研究OPA3-like在植物中的亚细胞定位及功能。
[Abstract]:[Objective] to obtain highly expressed optic nerve atrophy protein 3 (OPA3-like) and analyze its bioinformatics function. [Methods] the basic physicochemical properties of OPA3-like protein, signal peptide, transmembrane region and subcellular localization of OPA3-like protein were analyzed by using Vector NTI and ExPASy, Signal P, Plant-mPLoc and other online tools. T28a-OPA3-like, pET32a-OPA3-like were transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and Rosetta (DE3) respectively. The fusion protein was induced by IPTG, and the results were verified by SDS-PAGE. [results]OPA3-like protein is an unstable protein, which contains a transmembrane region and may be located in the chloroplast; the prokaryotic expression indicates that the fusion protein is two for the same recombinant plasmid. There was no obvious difference in the amount of expression in the bacteria, of which the conversion of pET28a-OPA3-like could express the fusion protein of 20kDa, and the conversion of pET32a-OPA3-like could express the fusion protein of the 37kDa, and the expression of the inclusion body was mainly in the form of inclusion body, transforming the expression of pET22b-OPA3-like non fusion protein. [Conclusion] the expression bacteria of the transformed pET32a-OPA3-like can express the fusion efficiently. Protein (37 kDa) is helpful to further study the subcellular localization and function of OPA3-like in plants.
【作者单位】: 石河子大学农业生物技术重点实验室;
【基金】:国家自然科学基金项目(“番茄OPA3-like基因的功能研究”,No.31460466)
【分类号】:Q946.1

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号:2123389

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