SIRT6基因沉默对人肝癌细胞凋亡的影响及其机制研究

发布时间：2018-08-04 09:44

【摘要】：该文旨在探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,SIRT6)基因沉默对人肝癌细胞凋亡的影响及其机制。逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测人肝癌细胞系(SK-Hep-1、Huh-7、PLC/PRF/5、Hep G2)和永生化肝细胞系(MIHA)中SIRT6基因的表达水平;利用慢病毒介导的sh RNA干扰技术靶向沉默SIRT6的表达,并通过RT-PCR和Western blot验证其沉默效率;流式细胞术检测SIRT6基因沉默对人肝癌细胞凋亡的影响,进一步应用RT-PCR和Western blot检测SIRT6基因沉默对凋亡抑制蛋白基因(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族m RNA和蛋白质水平的影响;最后,应用流式细胞术分析X连锁凋亡抑制蛋白基因(X-linked inhibitor of apoptosis protein gene,XIAP)在SIRT6基因沉默诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。结果显示,SIRT6基因在人肝癌细胞系中表达上调;慢病毒介导的sh RNA能抑制人肝癌细胞中SIRT6基因的表达;沉默SIRT6基因的表达能诱导人肝癌细胞凋亡,并降低XIAP的m RNA和蛋白质水平;过表达XIAP能逆转SIRT6基因沉默所诱导的人肝癌细胞凋亡。该研究结果提示,SIRT6基因沉默可能通过调节XIAP的表达从而诱导人肝癌细胞凋亡。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the effect of lentivirus-mediated silencing signal regulator 6 (silent information regulator 6 sir6) gene silencing on apoptosis of human hepatoma cells and its mechanism. Reverse transcriptase PCR (RT-PCR) and Western blot were used to detect the expression of SIRT6 gene in human hepatoma cell line (SK-Hep-1 Huh-7Hep G2) and immortalized liver cell line (MIHA) respectively, and the expression of SIRT6 gene was targeted by lentivirus-mediated sh RNA interference technique, and its silencing efficiency was verified by RT-PCR and Western blot. Flow cytometry was used to detect the effect of SIRT6 gene silencing on apoptosis of human hepatoma cells, and RT-PCR and Western blot were used to detect the effect of SIRT6 gene silencing on the level of m RNA and protein of (inhibitor of apoptosis proteinsin IAPs family. The role of X-linked inhibitor of apoptosis protein gene in apoptosis induced by SIRT6 gene silencing was analyzed by flow cytometry. The results showed that the expression of SIRT6 gene was up-regulated in human hepatoma cell line, lentivirus-mediated sh RNA could inhibit the expression of SIRT6 gene in human hepatoma cell line, and silencing the expression of SIRT6 gene could induce apoptosis and decrease the level of m RNA and protein of XIAP. Overexpression of XIAP can reverse apoptosis induced by SIRT6 gene silencing. These results suggest that silencing of SIRT6 gene may induce apoptosis of human hepatoma cells by regulating the expression of XIAP.
【作者单位】： 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(批准号:81472271,81270559)资助的课题~~
【分类号】：R735.7

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本文编号：2163462