高分辨率熔解曲线分析技术检测MASP-2基因点突变方法的建立及评价

发布时间：2018-08-26 13:53

【摘要】：目的建立高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术检测人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)基因g.21370(GT)位点单核苷酸多态性(SNP)的方法并进行评价。方法通过测序获得MASP-2基因g.21370(GT)位点3种不同基因型对照品,并用其建立HRM技术检测MASP-2基因点突变方法。利用60份待测DNA样品对建立的HRM方法的准确性、重复性及稳定性进行评价。结果建立的MASP-2基因HRM分析方法扩增反应正常,G/G、G/T、T/T 3种基因型区分明显,扩增产物Melt曲线良好,无非特异性产物出现;与基因序列测定结果对比显示准确性良好;对野生型和突变型标本3次重复检测结果显示,Tm值变异系数为0.017和0.023;χ~2检验结果表明,本研究选取的随机体检人群MASP-2基因g.21370(GT)位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡。结论建立的MASP-2基因g.21370(GT)位点HRM检测方法准确性高、重复性及稳定性良好,为下一步临床分析MASP-2基因SNP提供一定的技术支持。
[Abstract]:Objective to establish a high resolution fusion curve (HRM) assay for the detection of single nucleotide polymorphism (SNP) (SNP) at g. 21370 (GT) site of human mannose binding lectin associated serine protease (MASP-2) gene. Methods three different genotypes of MASP-2 gene G. 21370 (GT) locus were obtained by sequencing and the point mutation of MASP-2 gene was detected by HRM technique. The accuracy, repeatability and stability of the established HRM method were evaluated with 60 DNA samples. Results the HRM analysis method of MASP-2 gene showed that the three genotypes of G / G / T / T were distinguished obviously, the Melt curve of amplification product was good, and the results of gene sequence analysis showed good accuracy compared with the results of gene sequence analysis. The coefficients of variation of Tm were 0.017 and 0.023.The results of 蠂 ~ 2 test showed that the genotype frequency distribution of MASP-2 gene g.21370 (GT) locus was consistent with the Hardy-Weinberg genetic balance. Conclusion the established HRM detection method of (GT) locus g. 21370 of MASP-2 gene is accurate, reproducible and stable, which provides some technical support for clinical analysis of MASP-2 gene SNP.
【作者单位】： 河北北方学院医学检验学院;河北北方学院附属第一医院检验科;
【基金】：河北省张家口市科学技术研究与发展计划(No:1421109D)
【分类号】：R440

【参考文献】

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本文编号：2205066