高危中央型肝细胞癌临床病理特征及差异基因表达相关研究

发布时间：2018-10-14 13:37

【摘要】：这一博士学位课题由两部分研究工作构成。第—部分高中低危中央型肝细胞肝癌临床病理特征及预后研究目的：中央型肝细胞肝癌(centrally located hepatocellular carcinoma, cHCC)患者的临床病理特点及预后相关研究资料目前仍较少,本论文研究中央型肝细胞肝癌患者术前术后相关临床及病理资料,找寻预后相关危险因子。方法：应用病例对照研究的方法,回顾性分析自2006年10月至2013年1月中国医学科学院肿瘤医院173例接受手术治疗的肝细胞癌患者的临床病理资料,按术后无病生存期(DFS)的长短分三组,高危组(DFS≤1年)、中危组(1DFS≤3年)、低危组(3年)。术前对CT图像进行三维重建,并模拟切除,术中参照重建结果进行精准肝切除。术后比较三组患者的临床病理特征,采用Kaplan-Meier法计算生存率,以Log-rank检验进行生存曲线比较并进行单因素分析,Cox回归进行多因素分析中央型肝癌患者预后相关因素。结果：173例患者中,74例归为高危组,67例中危组,32例低危组。三组患者的中位生存期分别为13.5,24.0及45.5月(P= 0.000/0.000)。Log-rank检验单因素分析共确定9枚肝癌预后影响因子。其中,肝被膜浸润(P=0.022)、肿瘤临近大血管(1cm)(P=0.000)、肿瘤直径大于50mm(P=0.012)、脉管瘤栓(P=0.000)、肿瘤侵袭性生长(P=0.000)、术前TACE治疗(P=0.028)是影响患者术后复发的危险因素。男性性别(P=0.013)、甲胎蛋白200ng/ml (P=0.005)、肿瘤直径大于50mm(P=0.013)、肿瘤临近大血管(lcm)(P=0.000)、较高分化级别(P=0.003)、术前TACE治疗(P=0.010)、肿瘤侵袭性生长(P=0.001)是影响患者术后总体生存的危险因素。68.0%的高危组患者预后影响因子数目≥4,73.1%的中危组患者影响因子数目≥2,≤4。78.1%的低危组患者影响因子数目≤3。Cox多因素分析结果显示,肿瘤临近大血管(1cm)及侵袭性生长为影响中央型肝癌患者术后预后的独立因素。其在高危组患者中的比例为40.5%,在中危组为13.4%,低危组为3.1%(P=0.001)。高危组患者与其它两组患者相比,肿瘤临近下腔静脉(1cm)的几率也明显升高(21.6 vs.11.9 and 3.1%, P=0.023)。结论：高危组患者较之中危及低危组具有较多的预后危险因子。这些危险因子组合起来可以较好地进行中央型肝细胞癌患者术后预后评估及危险系数分级,进而可以有针对性地对高危组患者进行术后辅助治疗。第二部分高危型中央型肝细胞癌基因表达谱差异研究目的：肝细胞癌在不同个体中临床表现和预后特点差异较大。本研究通过分析比较不同DFS的患者肝癌组织mRNA表达谱差异,结合临床病理资料,发现一组可能具有中央型肝癌预后判断价值的分子标志。方法：回顾性筛选高危组8例,中危组10例,低危组15例患者,对其肝癌组织的mRNA表达谱,采用安捷伦4×44k基因芯片平台进行分析,检测获得差异表达基因。通过实时定量PCR (Real Time Quantiative PCR)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法验证部分差异表达基因及其蛋白产物。结果：通过表达谱芯片分析,在33例肝癌组织中发现438个差异表达基因。聚类分析显示,肝癌组织高表达基因236个,主要参与细胞外基质信号传导和细胞免疫等过程,低表达基因202个,主要参与细胞代谢等过程。高危组与低危组之间差异基因的表达水平具有明显差异(P0.05)。Real time PCR验证了其中6个基因：IFNGR1 (interferon gamma receptor 1,干扰素γ受体1)、LAMB3 (laminin β3,层连蛋白β3、MFSD2A (major facilitator superfamily domain containing 2A,促进调解蛋白超家族2A)、RASD1 (dexamethasone-induced RAS related protein 1,类固醇诱导的RAS相关蛋白1)、STARD5(StAR-related lipid transfer domain containing 5, StAR关脂质转运蛋白5)和TRIM35 (tripartite motif containing protein 35,三结构域蛋白35)。在93例肝癌肿瘤组织中进行实时定量PCR验证发现,上述6个基因的表达水平可以分为两大组：6个基因整体水平高表达组(High, n=59)和低表达组(Low, n=34)。生存分析显示两组患者无病生存时间有显著差别(P=0.024),且高表达组患者预后差。109例肝癌患者的ELISA结果显示,肝癌患者血浆浓度显著高于健康人(P0.001)。肝癌患者血浆MFSD2A浓度与其术后复发转移显著相关,高MFSD2A浓度(≥16.382 ng/ml)患者无病生存时间明显短于低MFSD2A浓度(16.382ng/ml)患者(P=0.037)。结论：比较高危组,中危组和低危组中央型肝癌组织mRNA表达谱差异,发现了一组与肝癌复发相关的差异基因与蛋白表达产物,为肝癌的分子机理研究及预后模型的建立提供了理论基础。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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