草鱼TGF-β1、Smad4基因的克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建

发布时间：2018-10-15 14:11

【摘要】：为研究TGF-β1/Smad4信号通路在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉发育过程中的作用机制,首先克隆了草鱼TGF-β1、Smad4基因开放阅读框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644bp。其次,在TGF-β1、Smad4序列两端分别加上相应的酶切位点,同时对pcDNA3.1(+)真核表达载体进行双酶切,将带酶切位点的片段正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建TGF-β1、Smad4基因的真核过表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1、pcDNA3.1(+)-Smad4。另一方面,根据TGF-β1、Smad4基因序列全长分别设计3对长度为48bp的shRNA,然后将构建好的shRNA插入到载体pRNA-U6.1/Neo中,即可成功构建TGF-β1、Smad4基因的RNA干扰表达载体pRNA-U6.1/Neo-TGF-β1和pRNA-U6.1/Neo-Smad4。
[Abstract]:In order to study the mechanism of TGF- 尾 1/Smad4 signaling pathway in (Ctenopharyngodon idellus) muscle development of grass carp, the open reading frame (ORF,Open reading frame) sequence 1 134 and ORF,Open reading frame) sequence 1 644 BP) of TGF- 尾 1 Smad4 gene of grass carp was first cloned. Secondly, the two ends of the TGF- 尾 1 Smad4 sequence were digested with corresponding endonuclease sites, and the pcDNA3.1 () eukaryotic expression vector was digested with double enzyme, and the fragment with the restriction site was inserted into the eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (). Construction of eukaryotic expression vector pcDNA3.1 () -TGF- 尾 _ 1npcDNA3.1 () -Smad4. for TGF- 尾 _ 1 Smad4 gene On the other hand, according to the full length of TGF- 尾 1G Smad4 gene, three pairs of 48bp shRNA, were designed and inserted into the vector pRNA-U6.1/Neo. The RNA interference expression vectors pRNA-U6.1/Neo-TGF- 尾 1 and pRNA-U6.1/Neo-Smad4. of TGF- 尾 1 and Smad4 gene were successfully constructed.
【作者单位】： 中国水产科学研究院珠江水产研究所;上海海洋大学水产与生命学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31402312) 国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-46-17)
【分类号】：S917.4;Q78

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本文编号：2272792