敲低RACK1基因抑制C2C12细胞中MyoG和MHC基因表达

发布时间：2018-10-24 07:13

【摘要】：本实验旨在研究RNA干扰(RNAi)RACK1基因对C2C12成肌细胞中肌分化标志基因MHC和MyoG表达的影响。将人工合成的靶向RAKC1基因的3条si RNA(1,2,3)转染C2C12细胞,用RT-qPCR方法检测并筛选干扰效率最高的1条siRNA。将筛选出的si RNA转染C2C12成肌细胞并诱导细胞分化,通过RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法在mRNA及蛋白水平检测RACK1基因沉默后对MHC和MyoG表达的影响。此外,Western blot方法检测RACK1基因沉默后对PI3K/Akt和Erk/MAPK通路激活的影响。结果表明:RACK1-si RNA-2干扰效率最高,转染48 h后抑制率可达70%。随后,C2C12细胞转染si RNA-2,诱导分化48h后RTqPCR表明,MHC和MyoG的m RNA表达均显著性下调(P0.05);诱导分化72 h后,Western blot和免疫荧光结果表明MHC和MyoG的蛋白表达明显低于对照组,但AKT和Erk磷酸化水平未见明显变化。上述结果表明,干扰RACK1能显著抑制MHC和MyoG的表达,提示RACK1正向调控C2C12成肌细胞的分化。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the effect of RNA interference of (RNAi) RACK1 gene on the expression of MHC and MyoG in C2C12 myoblasts. C2C12 cells were transfected with three synthetic si RNA (1 / 2 gene targeting RAKC1 gene. RT-qPCR method was used to detect and screen one siRNA. with the highest interference efficiency. The selected si RNA was transfected into C2C12 myoblasts and induced to differentiate. The effect of RACK1 gene silencing on the expression of MHC and MyoG was detected by RT-qPCR,Western blot and immunofluorescence at the mRNA and protein levels. In addition, the effect of RACK1 gene silencing on the activation of PI3K/Akt and Erk/MAPK pathway was detected by, Western blot method. The results showed that the interference efficiency of RACK1-si RNA-2 was the highest, and the inhibition rate reached 70% after 48 h transfection. Subsequently, the expression of m RNA in MHC and MyoG was significantly down-regulated in C2C12 cells transfected with si RNA-2, for 48 h (P0.05), and the expression of MHC and MyoG protein was significantly lower than that in control group 72 h after differentiation (P0.05). However, the phosphorylation levels of AKT and Erk did not change significantly. These results suggest that interfering with RACK1 can significantly inhibit the expression of MHC and MyoG, suggesting that RACK1 positively regulates the differentiation of C2C12 myoblasts.
【作者单位】： 武汉轻工大学动物营养与饲料科学湖北省重点实验室;中南民族大学生命科学学院;
【基金】：湖北省自然科学资助项目(2015CFB514) 湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目(T201508)
【分类号】：Q78

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王训,张成,刘焯霖,陈国俊;小鼠成肌细胞的培养纯化和鉴定方法[J];中山医科大学学报;2000年S1期

2 陈松林,张为西,刘晓蓉,张成;成肌细胞培养的重复肌块法[J];中山医科大学学报;2002年05期

3 陈晓萍,刘红,吴燕,刘淑红,吴海涛,范明;成人成肌细胞快速高效分离方法的建立[J];中华神经医学杂志;2003年06期

4 舒丹毅;唐军民;唐岩;李枫;;巨噬细胞条件培养液对原代培养小鼠成肌细胞生长的影响[J];解剖学报;2007年03期

5 陈勇;周建大;邹永华;殷照初;李文波;李明;陈孜孜;李万猛;;人VEGF165基因转染成人成肌细胞的实验研究[J];激光生物学报;2010年01期

6 黄富国;张斌;杨志明;张姝江;解慧琪;;改良载体提高大鼠成肌细胞移植效率[J];中国临床康复;2006年25期

7 何等旗;唐休发;华成舸;冯杨;李小玉;;两种不同来源成肌细胞存活率的比较研究[J];国际口腔医学杂志;2007年03期

8 王守立,杨光华,步宏,周桥,郭立新,张红英,王华,叶绿;人胚成肌细胞体外培养的生物学特性研究[J];生物医学工程学杂志;2004年02期

9 汪涛,唐军民,舒丹毅,唐岩,伊焕发;小鼠成肌细胞的体外培养及生物学特性的观察[J];天津医科大学学报;2002年02期

10 张斌;黄富国;解慧琪;杨志明;李秀群;;透明质酸钠对大鼠成肌细胞增殖和分化的影响[J];中国修复重建外科杂志;2006年07期

相关会议论文 前10条

1 李美山;张成;张雅妮;王淑辉;于美娟;熊符;尚延昌;彭福宁;;成肌细胞促进骨髓间充质干细胞表达成肌调节因子的研究[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

2 朱文辉;王予彬;华咏;符雪莲;;成年犬骨骼肌成肌细胞的体外简易培养法[A];第十七届中国内镜医师大会论文集[C];2007年

3 吴海涛;陈晓萍;刘红;刘淑红;范明;;CNTF对在体和离体成肌细胞作用的比较[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

4 何等旗;唐休发;华成舸;冯扬;李小玉;;两种不同来源成肌细胞存活率的比较研究[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年

5 周建大;罗成群;贺全勇;李文波;陈继业;李明;;成人成肌细胞的分离与体外培养[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年

6 何等旗;唐休发;华成舸;冯扬;;人基质细胞衍生因子-1基因转染成肌细胞及其表达[A];海峡两岸2008口腔癌诊治与修复重建新进展研讨会论文集[C];2008年

7 米少华;卢永昕;荣书玲;刘启云;苏冠华;;逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子Ⅰ在大鼠成肌细胞中的表达及分泌[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

8 陈晓萍;刘红;吴海涛;刘淑红;吴燕;范明;;睫状神经营养因子对成人成肌细胞的抑分化作用及其机理[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年

9 王奎鹏;冯国清;胡香杰;;巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及分化的影响[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

10 乔东访;路艳蒙;傅文玉;李佩英;朴英杰;;5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞分化为成肌细胞的鉴定[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

相关重要报纸文章 前6条

1 吴一福;成肌细胞移植可激活抑制心肌细胞恢复[N];中国医药报;2006年

2 董映璧;胚胎成肌细胞可治心跳过慢[N];科技日报;2005年

3 刘 向;德利用自体成肌细胞治疗心肌梗死[N];中国中医药报;2004年

4 记者 田学科;科学家弄清肌肉发育中的关键环节[N];科技日报;2007年

5 毛天球;组织工程学研究概况[N];中国医药报;2000年

6 陆志城;肌干细胞——再续神奇[N];医药经济报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 Mahmood Nazari;腺相关病毒（AAV）过表达Follistatin在绵羊成肌细胞中的研究[D];中国农业科学院;2014年

2 Md.Shahjahan;肉鸡2个肌肉发育相关基因的多态性与功能研究[D];中国农业科学院;2015年

3 罗文;miRNAs介导的信号通路对鸡成肌细胞增殖和分化的调控[D];华南农业大学;2016年

4 汪璇;白介素6类细胞因子对成人成肌细胞增殖和分化影响的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

5 高辉;雷帕霉素对成肌细胞治疗骨骼肌损伤的影响及其作用机制[D];华中科技大学;2014年

6 丁可;基因修饰成肌细胞结合可注射温敏凝胶支架构建组织工程骨的实验研究[D];第三军医大学;2013年

7 陈疾忤;联合应用携hIFNγ基因与携hIGF-1基因的成肌细胞治疗小鼠骨骼肌损伤[D];复旦大学;2008年

8 孙天威;组织工程化肌及成肌细胞移植的实验研究[D];四川大学;2005年

9 张力;骨碎补总黄酮促进转基因成肌细胞成骨分化及引导性骨再生的研究[D];辽宁中医药大学;2012年

10 唐浩;转基因成肌细胞治疗慢性心肌梗死实验研究—体外实验部分[D];中南大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 刘瑞凿;肉用绵羊IncRNA特征分析及细胞水平功能验证[D];中国农业科学院;2015年

2 冯芾;MiR-145对C2C12成肌细胞增殖的影响[D];西北农林科技大学;2015年

3 周欣茹;Musclin基因对成肌细胞增殖、葡萄糖摄取和氨基酸分解的影响及其分子机制[D];山西农业大学;2015年

4 任娇;成肌细胞中T1R1/T1R3介导调控mTOR信号的氨基酸筛选及分子机制[D];华中农业大学;2015年

5 解放;CFL2基因低表达对小鼠成肌细胞C2C12肌纤维影响及机制的初步研究[D];辽宁医学院;2015年

6 王浩瀚;过表达Six1对鸭成肌细胞蛋白质代谢相关基因表达的影响及调控途径初探[D];四川农业大学;2014年

7 赵阳玫;瘦素对鸭成肌细胞增殖与分化相关基因表达的影响[D];四川农业大学;2015年

8 李杰;MiR-127-3p在C2C12成肌细胞增殖和分化的作用及调控机制的研究[D];甘肃农业大学;2016年

9 术蓉;体外炎性条件下成肌细胞/分化肌管的免疫特性研究[D];南方医科大学;2016年

10 唐啸寅;miR-340-5p靶向Bai3、ROCK1、DMD及其对成肌细胞的影响[D];华中农业大学;2016年

，

本文编号：2290689