一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析

发布时间：2018-10-30 10:35

【摘要】：【目的】克隆耐冷菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-6)的几丁质酶基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其酶解产物。【方法】采用PCR扩增法从Pseudoalteromonas sp.DL-6中克隆几丁质酶基因(chi A),连接到表达载体p ET28a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测几丁质酶Chi A的分子量与纯度,4-甲基伞形酮荧光底物4MU-(Glc NAc)2测定酶活,电喷雾质谱(ESI-MS)检测酶解产物。【结果】chi A基因(Gen Bank登录号KF234015)在大肠杆菌中高效表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化几丁质酶Chi A的总活力可达168.68 U。ESI-MS检测结果表明重组蛋白酶解1%胶体几丁质的产物为几丁寡糖。【结论】利用内切几丁质酶Chi A水解几丁质生产几丁寡糖,为其在食品、医药和农业等领域的潜在应用提供有利参考。
[Abstract]:[objective] to clone the chitinase gene of Pseudomonas alternata (Pseudoalteromonas sp.DL-6) and express it in prokaryotic cells. The recombinant protein was purified and its hydrolyzed product was studied. [methods] chitinase gene (chi A), was cloned from Pseudoalteromonas sp.DL-6 by PCR amplification and ligated to the expression vector p ET28a,. The molecular weight and purity of chitinase Chi A were detected by SDS-PAGE, and the activity of 4MU- (Glc NAc) 2 was determined by 4MU- (Glc NAc) 2. Electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) was used to detect the enzymolysis products. [results] chi A gene (Gen Bank accession number KF234015) was highly expressed in Escherichia coli. The total activity of purification of chitinase Chi A by Ni-NTA affinity chromatography can reach 168.68 U.ESI-MS. The result shows that the product of recombinant proteolysis of 1% colloidal chitin is chitin oligosaccharide. [conclusion] using endo-chitinase. Chi A hydrolyzes chitin to produce chitin oligosaccharide, It provides a useful reference for its potential application in food, medicine and agriculture.
【作者单位】： 大连大学生命科学与技术学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31500039) 辽宁省大学生创新创业训练计划项目(No.201511258003)~~
【分类号】：Q78;Q55

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