荧光定量PCR法检测重组毕赤酵母工程菌的外源基因拷贝数

发布时间：2018-11-08 13:03

【摘要】：提出了重组毕赤酵母工程菌p PICZ-DT30/GS115基因组中外源基因DT30拷贝数的实时荧光定量PCR方法。该重组工程菌用来表达人胰岛素前体(PI-DT30),其表达量的高低、菌种稳定性对工艺研究及整体项目成本等有重大影响。外源基因拷贝数是检测表达量的一个重要指标。该方法中,利用毕赤酵母的看家基因GAP(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)为内参,分别建立含GAP基因和DT30基因的双标准曲线。将工程菌基因组进行荧光定量PCR,根据标准曲线和Ct值计算目的基因DT30在重组毕赤酵母工程菌中的拷贝数,结果为7个。
[Abstract]:A real-time fluorescence quantitative PCR (PCR) method for DT30 copy number of recombinant Pichia pastoris (Pichia pastoris) genome was proposed. The recombinant engineering strain was used to express human insulin precursor (PI-DT30). The level of expression and the stability of bacteria species had great influence on the technological research and overall project cost. The copy number of exogenous gene is an important index to detect the quantity of expression. In this method, the double standard curve containing GAP gene and DT30 gene was established by using the housekeeping gene GAP (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) of Pichia pastoris as internal reference. The copy number of target gene DT30 in recombinant Pichia pastoris was calculated by fluorescence quantitative PCR, according to standard curve and Ct value. The result was 7.
【作者单位】： 重庆理工大学药学与生物工程学院;重庆富进生物医药有限公司;
【分类号】：Q933

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本文编号：2318583