百合斑驳病毒外壳蛋白基因原核表达、抗血清制备及其应用

发布时间：2018-11-23 10:56

【摘要】：为了建立百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)的快速检测方法,采用RT-PCR方法从感染LMoV的百合叶片中克隆该病毒的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,然后连接到原核表达载体pET28a(+)上,导入大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)并诱导表达,以表达的重组蛋白为抗原制备该病毒的抗血清。结果显示:LMoVCP全长为822 bp,编码274个氨基酸;SDS-PAGE及Western blot检测结果表明,经IPTG诱导得到了分子量约为34 kD带有HIS标签的目的蛋白;用该蛋白制备的抗血清经间接ELISA和Western blot检测结果显示,其效价为1∶51 200,具有较高的特异性,可用于感染LMoV百合的检测,其检测结果与RT-PCR检测结果一致。
[Abstract]:In order to establish a rapid detection method for lily mottle virus (Lily mottle virus,LMoV), the coat protein (coat protein,CP) gene of lily mottle virus (lily) was cloned from the leaves of lily infected with LMoV by RT-PCR method. Then the recombinant protein was ligated to the prokaryotic expression vector pET28a () and introduced into Escherichia coli Escherichia coliBL21 (DE3). The recombinant protein was used as antigen to prepare the antiserum of the virus. The results showed that the total length of LMoVCP was 822 bp, encoding 274 amino acids, and the results of SDS-PAGE and Western blot showed that the target protein with a molecular weight of 34 kD with HIS tag was obtained by IPTG induction. The results of indirect ELISA and Western blot detection showed that the antiserum prepared with this protein had a high specificity and could be used to detect the infection of LMoV lily. The results were consistent with that of RT-PCR.
【作者单位】： 大连理工大学生命科学与技术学院;大连理工大学生命与医药学院;
【基金】：国家自然科学基金(31070621)
【分类号】：S436.8

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本文编号：2351344