山梨酸纳米微粒对Lux基因标记的诱导型及组成型重组发光菌抑菌作用的研究

发布时间：2018-11-26 17:35

【摘要】：本研究选取诱导型重组菌E.coli DPD2794、E.coli TV1061及组成型重组菌E.coliTop10-P.luxCDABE、E.coli DH5α-P.luxCDABE为作用菌株,通过山梨酸纳米微粒对重组发光菌生长、发光情况影响,及场发射扫描电镜(SEM)成像结果,对山梨酸纳米微粒的抑菌活性进行评价,对其作用机理进行了初步探究。试验得到以下结论:1.诱导型重组菌E.coli DPD2794、E.coli TV1061最适发光温度分别为27℃、28℃,对数中后期达到最大发光强度255、422,最大耐受发光的温度为33℃、32℃。E.coli DPD2794在pH 6时菌体生长良好、发光强度最大。山梨酸纳米微粒对诱导型重组菌E.coli DPD2794、E.coli TV1061的最小抑菌浓度(MIC)分别为60μg/mL和64μg/mL,对组成型重组菌E.coli Top10-P.luxCDABE和E.coli DH5α-P.luxCDABE的MIC分别为52μg/mL和40μg/mL。2.加入的山梨酸纳米微粒,对两株组成型重组菌,随着浓度增加,最大发光强度显著降低(P0.05);加入各菌株MIC浓度的山梨酸纳米微粒,菌体生长被完全抑制,不产生发光。对于诱导型重组发光菌,E.coli DPD2794仅对有毒化合物的基因毒性产生响应,高浓度山梨酸纳米微粒抑制菌体发光;当浓度≤3.75μg/mL(即1/16 MIC)对菌体发光有促进作用。E.coli TV1061能够对多种引起代谢变化的有毒化合物产生响应。高浓度(≥1/4 MIC)处理菌体不发光,低浓度抑制菌体发光,山梨酸纳米微粒对E.coli TV1061的发光无促进作用。根据两株诱导型重组发光菌的发光机制,推测山梨酸纳米微粒是通过对菌体细胞造成DNA损伤进行抑菌作用。诱导型重组菌和组成型重组菌经山梨酸纳米微粒处理后的场发射扫描电镜(SEM)成像显示,细胞膜被破坏,菌体破裂,胞内物质溶出,部分破损菌体有山梨酸纳米微粒附着。根据SEM成像结果及壳聚糖纳米微粒、山梨酸的抑菌作用机理,推断山梨酸纳米微粒的作用机制为利用壳聚糖纳米微粒的粘膜粘附性,使山梨酸纳米微粒与膜蛋白结合,改变膜蛋白的结构进而影响菌体生理结构;山梨酸纳米微粒释放的部分山梨酸分子进入菌体内部,与微生物中酶的巯基结合,破坏菌体酶系结构,从而抑制微生物生长繁殖。
[Abstract]:In this study, the recombinant bacteria E.coli DPD2794,E.coli TV1061 and E. coli DH5 伪-P.luxCDABE, E. coli, E. coli and E. coli, respectively, were selected as the acting strains. The growth and luminescence of the recombinant luminescent bacteria were influenced by sorbic acid nanoparticles. The bacteriostatic activity of sorbic acid nanoparticles was evaluated by field emission scanning electron microscopy (SEM) imaging and the mechanism of its action was preliminarily explored. The results are as follows: 1. The optimum luminescence temperature of inducible recombinant strain E.coli DPD2794,E.coli TV1061 was 27 鈩，

本文编号：2359190