沉默CHOP基因降低衣霉素诱导的小鼠肝癌Hepa 1-6细胞凋亡

发布时间：2018-12-20 06:44

【摘要】：目的构建有效针对小鼠C/EBP同源蛋白(CHOP)的shRNA真核表达载体,基因沉默后对Hepa 1-6细胞凋亡的影响。方法设计合成针对CHOP的shRNA靶序列及无同源性的shRNA序列作为阴性对照,退火后重组入p LKO.1-TRC载体,转化扩增后进行快速双酶切鉴定;慢病毒包装法转染293T细胞获得的病毒上清转染Hepa 1-6细胞,用含嘌呤霉素的培养基连续筛选10获得稳定株,Western blot检测Caspase9和c-PARP蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期。结果各shRNA载体构建成功;与阴性对照组相比,sh CHOP组能显著抑制CHOP蛋白的表达(P0.05);且CHOP基因沉默后明显降低了衣霉素诱导的细胞凋亡(P0.05)。结论 CHOP基因沉默能减缓衣霉素诱导内质网应激产生的Hepa 1-6细胞凋亡。
[Abstract]:Objective to construct an eukaryotic expression vector of shRNA targeting mouse C/EBP homologous protein (CHOP), and to investigate the effect of gene silencing on apoptosis of Hepa 1-6 cells. Methods shRNA target sequences for CHOP and shRNA sequences with no homology were designed and synthesized as negative control. After annealing, they were recombined into p LKO.1-TRC vector and identified by rapid double enzyme digestion after transformation and amplification. The virus supernatant of 293T cells transfected with lentivirus packaging was transfected into Hepa 1-6 cells. The stable strain, Western blot and c-PARP protein expression were detected by continuous screening of 10 culture medium containing purine mycin, and the cell cycle was detected by flow cytometry. Results the shRNA vectors were successfully constructed. Compared with the negative control group, sh CHOP could significantly inhibit the expression of CHOP protein (P0.05), and CHOP gene silencing significantly decreased the apoptosis induced by itamine (P0.05). Conclusion CHOP gene silencing can attenuate the apoptosis of Hepa 1-6 cells induced by endoplasmic reticulum stress.
【作者单位】： 福州总医院福建省移植生物学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(81270431)
【分类号】：R73-3

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