霍乱弧菌毒力基因zot的克隆表达及生物活性

发布时间：2018-12-27 16:01

【摘要】：目的对霍乱弧菌zot毒力基因进行表达并研究重组蛋白的生物活性。方法从霍乱弧菌(Vibrio cholerae)MO45中克隆zot的全基因序列,构建其原核表达质粒pET-32a(+)-zot并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,通过诱导表达和亲和层析纯化重组蛋白,研究zot表达蛋白对人小肠上皮细胞的凋亡作用。结果纯化蛋白的浓度为0.324mg/mL,经Western blot验证表达蛋白为目的蛋白,用流式细胞仪检测经表达蛋白作用的人小肠上皮细胞显示重组zot蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。结论成功克隆表达了霍乱弧菌毒力基因zot,重组蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。
[Abstract]:Objective to express virulence gene of Vibrio cholerae zot and to study the bioactivity of recombinant protein. Methods the whole gene sequence of zot was cloned from (Vibrio cholerae) MO45 of Vibrio cholerae. The prokaryotic expression plasmid pET-32a ()-zot was constructed and transformed into E. coli E.coli BL21 (DE3). The recombinant protein was purified by induction and affinity chromatography. To study the effect of zot expression protein on apoptosis of human intestinal epithelial cells. Results the concentration of purified protein was 0.324 mg / mL. The expressed protein was confirmed by Western blot as the target protein. Flow cytometry analysis showed that recombinant zot protein could induce early apoptosis of human intestinal epithelial cells. Conclusion cloning and expressing virulence gene zot, recombinant protein of Vibrio cholerae can induce early apoptosis of human intestinal epithelial cells.
【作者单位】： 江西省疾病预防控制中心传染病所;
【基金】：江西省科技厅项目基金(No.20151BBG70106)~~
【分类号】：R378.3

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