A亚群禽白血病病毒env基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

发布时间：2019-01-20 09:31

【摘要】：为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体p Fast Bac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。间接免疫荧光试验(IFA)和免疫印迹试验(Western-blot)结果显示,重组蛋白可与抗ALV-A抗体发生特异性反应,重组蛋白分子大小约为90 000,与预期大小相符,表明env基因在Sf9细胞中获得了良好表达。
[Abstract]:In order to obtain the expression product of env gene of subgroup A avian leukemia virus (ALV-A), env gene was amplified by reverse transcription PCR using ALV-A AH10 virus RNA as template. Env gene was cloned into the transfer vector pFast Bac1 and transformed into DH10Bac receptive cells. Recombinant baculovirus was obtained by transfection of recombinant shuttle plasmid r Bacmid-env Agnar Bacmid-env A into insect cell Sf9,. The results of indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western blotting assay (Western-blot) showed that the recombinant protein could react specifically with the anti ALV-A antibody. The molecular size of the recombinant protein was about 90 000, which was in accordance with the expected size. The results showed that env gene was well expressed in Sf9 cells.
【作者单位】： 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(31201881)
【分类号】：S852.65

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 蔡丽娅;秦爱建;;我国禽白血病病毒生物学特点及其控制[J];中国兽药杂志;2009年11期

2 胡晓苗;张丹俊;侯宏艳;戴银;赵瑞宏;潘孝成;周学利;沈学怀;朱传明;;活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法探讨[J];安徽农业科学;2013年26期

3 秦爱建,刘岳龙,周绮雯,黄维嘉;J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果[J];中国预防兽医学报;2001年03期

4 叶建强;秦爱建;邵红霞;金文杰;刘岳龙;;J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立[J];中国兽医学报;2006年03期

5 冯小宇;徐镔蕊;Lucy F.Lee;Maoxiang Li;;蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离与初步鉴定[J];中国兽医杂志;2008年01期

6 杨守锋;邢红方;彭远义;;J亚型禽白血病病毒病原学及诊断方法研究进展[J];畜禽业;2009年04期

7 孙淼;李金彩;郭振华;曹红;常建宇;陈福勇;;J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定[J];中国兽医杂志;2009年10期

8 郝春丽;胡梅;柴建亭;;禽白血病病毒特性的研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2010年01期

9 张在平;田进;孟庆文;马学恩;;Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2010年05期

10 侯新华;申茂欣;鹿欣伦;楚电峰;刘东;孙健;左青山;杜元钊;;蛋鸡血管瘤型J亚群禽白血病病毒的分离与鉴定[J];中国家禽;2011年03期

相关会议论文 前10条

1 杨玉莹;叶建强;赵振华;秦爱建;顾玉芳;;禽白血病病毒J亚群内蒙株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年

2 廖亚琳;廖明;曹伟胜;;禽白血病病毒受体研究进展[A];第三届（2012）中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2012年

3 孙淼;吴艳;郭振华;曾凡桂;曹红;郑世军;陈福勇;;J亚型禽白血病病毒分子流行病学调查及进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

4 顾小雪;韩雪;蔡林;张硕;李晓霞;汪葆s，

本文编号：2411910